EGY48酵母感受态细胞

特别提示：包括EGY48酵母感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：EGY48酵母感受态细胞
英文名称：EGY48 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0067
产品规格：10×100μl/50×100μl

EGY48菌株是LexA系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation marker为：his3，trp1，ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS(上游激活序列)来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。
EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。
质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；
质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白；
报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x8)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGBKT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
MATα，ura3，his3，trp1，LexAop(x6)-LEU2
操作说明：
1.取100 μl冰上融化的EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5μg，Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴，重复一次)10 μl，PEG/LiAc 500μl并吸打几次混匀，30度水浴30分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3.5000 rpm离心40s弃上清，ddH2O 400μl重悬，离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μl重悬，涂板,29℃培养48-96h。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.EGY48酵母菌株对高温敏感，zuì适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。

除了EGY48酵母感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
货号：BTN100103B
规格：20次
本裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备裂殖酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品。

产品特点：
1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备裂殖酵母感受态细胞。
2. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟。
3. 主要用于裂殖酵母S. pombe ，其他多种实验用酵母菌株zuì好选用酵母化学感受态细胞制备试剂(BTN81109)。
4. 受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母(如双杂交体系中的酵母)。
5. zuì高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
8. 本产品可以制备20只裂殖酵母感受态细胞(需要100mL裂殖酵母培养液)，其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带高效转化液。

试剂盒组成：

组分	BTN100103A	BTN100103B
溶液A	1ml	1ml
高效裂殖酵母转化液	-	一套(20次)
使用说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用效果：
将一个酵母菌落接种到SLD培养基中，30℃摇晃培养直到OD600达到0.6-1.0，冰浴15分钟后离心弃上清，用自备无菌水洗涤三次，然后用相当于菌液zuì初体积百分之一的溶液A重悬，按每管50μl分装，放-80℃保存。