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- gelatins
- 进口，国产
- JC9643
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
RT
- 库存：
大量
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
20T
自备材料：
水平摇床或侧摆摇床
去离子水(超纯)
乙醇、冰乙酸
操作步骤(仅供参考)：
准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。
2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。
3、固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。
4、洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗2次，每次5min。
5、水洗：去离子水清洗凝胶2次，每次5min。
6、增敏：配制银染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h内用完。室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min，立即用去离子水清洗凝胶2次，每次1min。
7、银染：配制银染工作液，即取Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml去离子水中，混匀，即得1×Silver Stain，一般应2h内用完。取凝胶入1×Silver Stain，在摇床上室温摇动10～20min。
8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶2次，每次30s，摇动速度在60～70rpm。总的水洗时间应控制在1.5min内。
9、显影：配制银染显影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Developer，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室温孵育2～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2～3min，亦可延长至5min以上，如果显影效果不佳，可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。
注意事项：
1、背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分；③凝胶中残留物质未去除干净；④去离子水的纯度过低。
2、蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低；②银染后水洗时间过长；③蛋白量较低；④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。
3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分浸没，应加入足量溶液；②容器没有清洗干净；③凝胶接触金属物质；④指纹或其他压迹。
4、本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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