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蛋白质印迹/Western Blot

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  • 蛋白质印迹/Western Blot
  • 天津
  • 2025年07月11日
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      天津浩合生物

    • 服务名称

      蛋白质印迹/Western Blot


    浩合生物立足于生物医学领域,以客户需求为导向,建立了完善的生物医学科研项目方案设计、生物信息学大数据挖掘及分析、生物医学科研项目管理、基金申请及论文发表辅助、整体课题外包服务等系列平台,为客户提供最优化的实验解决方案和专业的“一站式”科研学术服务平台。


    技术背景  

    Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚丙烯3酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白,经转膜、封闭后目标蛋白与特异性一抗结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体起反应,经过底物显色,分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性,可以对目标蛋白进行定型和半定量的分析。通过抗原抗体反应对目标蛋白的表达进行半定量检测,还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析。WB作为一种方便可靠的研究工具,将与质谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。

    服务内容

     
    • 蛋白质抽提
    • 蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明完成
    • SDS-PAGE凝胶电泳: 将准备好的样品液和marker分别上样,电泳分离蛋白
    • 蛋白质转移到PVDF膜, 按照蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,120 V恒压转移1~2小时
    • Western blot膜的封闭和抗体孵育:PVDF膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合,然后将封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。再加入HRP标记的二抗以结合一抗,室温孵育膜1小时
    • Western blot结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用Image J分析软件将图片上每个特异条带的灰度值数字化
    • westernblot数据分析:目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品中目的蛋白相对含量
    • 提供实验报告,包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据

    客户提供
     
    • 若客户自行提供样品,则样品须符合以下要求:组织量在200-400 mg; 细胞量约107个;建议提供阳性对照;若客户提供一抗,要求为符合技术要求的浓缩或即用型一抗;客户也可委托本公司代购抗体或者定制抗体
    • 客户须在实验开始前提供完整的待检蛋白信息,包括蛋白种属、大小等

    最终交付
     
    • 实验原始数据、原始胶片、电子版图片、分析结果
    • 全套详细实验报告,包括实验流程、材料方法、实验结果等
     

     






    天津浩合生物科技有限公司
    TIANJIN HAOHEBIO CO., LTD.

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      WB 作为传统的实验技术,在实验室中得到了广泛的应用。 讲座从 WB 的基础原理、实验流程及常见问题和解决方法等方面对此项技术进行全面的介绍,结合具体实验案例,深入浅出的对 WB 技术进行解析,无论实验新手还是富有经验的操作者,都可以从讲座中获得所需的知识,用于获得更为完美的 WB 实验结果。

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