Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝

特别提示：包括Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG)
英文名称：DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting(with)
产品货号：ZN1931
产品规格：1盒

工作原理：聚合标记法是一种酶标记方法，其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测，更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗，更重要的是使条带更清晰，甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一，反应产物为不溶于水、二甲*和醇的棕色沉淀物，适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方，具有操作简单，储存稳定，信号灵敏度高，持续时间长，背景低，结果易保存等优点。
保存条件：－20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期：一年。
试剂盒的内容：
(1)封闭试剂：10 g 蛋白干粉×1 包。
(2)浓缩抗体稀释液：20 ml×1 瓶，为10倍浓缩液。
(3)过氧化物酶标记山羊抗兔IgG，效价 1：200-400。
(4)DAB 显色试剂，含
显色剂 A：DAB×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 B：H2O2×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 C：×40倍 TBS 浓缩缓冲液(含*化镍)，3ml。
使用说明 需要而未提供的试剂和器材：
1．转印了蛋白样品的NC 膜或PVDF 膜：通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原，将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2．稀释缓冲液：使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐酸调节 pH 值(7.2-7.6)。
3．洗涤缓冲液：每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：选择适合的一抗，用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5．摇床：膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃，需在摇床上操作。
6．相机：记录结果。
操作程序：
1.通过聚*烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF 膜上。
3.封闭硝酸纤维膜：用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml，20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5.配制抗体稀释液：取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6.硝酸纤维膜孵育一抗：用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强，应提高一抗的浓度；如果有非特异性的条带，应提高一抗的稀释度。
7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8.硝酸纤维膜孵育二抗：用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗，效价 1：200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A，B，C 各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色 1－30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11.观察，照相。
注意事项：
1．试剂频繁使用时置４℃，不常使用时置－20℃。显色剂 A 需置－20℃冷冻保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2．显色工作液应新鲜配制。

除了Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(兔IgG),，我公司还供应以下相关产品：



名称：免疫染色封闭液
货号：YT087
规格：100ml
本品可以用于免疫染色时切片或细胞样品的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和样品的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。

本免疫染色封闭液中含有适量Triton X-100，可以通透细胞膜。经本免疫染色封闭液处理的细胞样品可以检测细胞内的目的蛋白，包括细胞浆内和细胞核内的目的蛋白。

按照每组样品封闭需要5-10毫升封闭液计算，一个包装的免疫染色封闭液可以封闭10-20组样品。

注意事项： 通常在室温封闭60分钟即可。如果对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒
货号：ZN1872
规格：1盒
产品规格：
Bradford 染色液 100ml
BSA 标准品 20ml(2mg/ml)
产品描述：应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔
产品保存：4℃保存，一年有效。
产品说明：Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据 Bradford 染液(考马斯亮蓝 G-250 染料)与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从 A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比 Lowry 法大约高四倍，最低蛋白检测量可达 1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项：
1．各取样操作应准确无误。
2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。
3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4．Bradford 染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热 20min。
5．Bradford 染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明：
一、配制 BSA 标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二、检测方法
A．试管法检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2.加入1ml Bradford 染色液，混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定 595nm 处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B．标准微孔板检测(线性范围：100-1500μg/ml)
1.各取 5μl 各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
2.每孔加入 250μl Bradford 染色液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用 7-10μl 标准品/待检样本，和 250μlBradford 染色液来进行检测。