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上海伟进生物科技有限公司
A. 蛋白抽提 -蛋白样品的制备
B. 蛋白酶 /磷酸酶抑制剂 对细胞进行裂解后,与目标蛋白一起释放出来的还有蛋白酶和磷酸酶,它们会水解蛋白为多肽或氨基酸。此过程会导致许多重要蛋白的流失,进而严重的影响下有实验。因此需要在细胞的裂解过程中加入相应蛋白酶或磷酸酶抑制剂,从而保证目标蛋白的完整性。
目前常用比色法来确定样品蛋白的含量。将化学试剂加入到蛋白样品溶液中发生颜色变化,利用分光光度计或酶标仪检测这一变化,并与已知浓度的蛋白标准曲线做比较从而确定样品的浓度。上海伟进提供 Pierce公司的蛋白定量产品, pierce的 BCA蛋白定量试剂盒是全球最畅销的产品之一,深受研究人员的依赖。
为了节省样本,提高下有实验的成功率,需要对蛋白样品进行浓缩,从而提高蛋白样品的有效检测浓度。在此本公司提供由 Millipore(密理博)的超滤浓缩管(离心过滤),以简单的离心方法将您的蛋白样品浓缩。客户可根据截留的分子量,膜类型,样本体积来选择该产品
SDS-PAGE 的基本原理是在蛋白质样品中加入 SDS和含强还原剂巯基乙醇或 DTT的样品处理液。 SDS作为强阴离子表面活性剂,破坏蛋白质分子的二级和三级结构;强还原剂断开二硫键破坏蛋白质的四级结构,是蛋白质分离解聚成单链分子。解聚后的侧链与 SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质 -SDS复合物,此时蛋白质的电泳迁移率则与所带电荷的性质无关,主要取决于蛋白质的相对分子质量。因此 SDS-PAGE电泳可将不同分子量大小的蛋白质分离开,从而便于对目的蛋白进行研究。 SDS-PAGE 电泳结束后常常通过染色和脱色评定结果的优劣,一般选择考马斯亮蓝 R-250进行染胶,染色灵敏度高。另外也常常对转膜后的凝胶上残余蛋白进行染色,来分析转膜效果的好坏。
蛋白分子量标准( Marker)不仅具有指示蛋白条带对应的分子量大小,还可以检测蛋白转移师傅成功或者蛋白样品在凝胶上的电泳程度等作用。选择合适的 Marker不仅方便准确的定性目的蛋白,还能够很好的监测整个实验体系,一遍分析可能遇到的问题, Fermentas公司提供了各种范围的未染色 /预染色的蛋白 Marker以及修饰标记蛋白 Marker。
电泳结束后需要将分离后的蛋白质从凝胶体系中转移到固相载体(如 PVDF膜, NC膜)上,并在膜上进行一抗,二抗的孵育与洗涤,最后进行显色。使用考马斯亮蓝 R-250对转膜后的凝胶上残余蛋白的检测,可以监测转膜效果的好坏。
当同一个样本中含有两个或两个以上的蛋白需要检测,当对某一个蛋白的检测结果不理想需要调整实验条件货重新分析做验证实验,有了抗体剥离试剂,讲印迹膜上的抗体洗脱,让你在同一张膜上做多次杂交实验,让你免去重复做电泳和转膜的繁琐不走,大大节省你的试验时间和成本。
内参即内部参照,对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白,它们在各种组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用做参照物。 内参的作用: 1检测整个 WB流程是否正常,包括转膜,显色及发光体系等; 2检测基因表达产物是否正确及表达产微量的相对变化; 3校正上样误差,确保蛋白定量结果的可信度;
伟进公司提供的标签抗体涵盖 6-Histidine, Flag-tag, HA tag, c-Myc, GST.GFP等常用标签,种类齐全,特异性高,是进行融合蛋白研究不可或缺的辅助工具之一。 |
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