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- 2025年08月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pKillerRed-Mem细胞膜定位质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验PUC 质粒并且做「蓝白斑」筛选。 保存： ①为避免反复冻融，建议小体积分装制备好的感受态（如 100μL / 管），分装所用的 EP 管需提前灭菌并预冷（4℃ 或 - 20℃），减少细胞温度波动； ②感受态细胞制备后，需立即用液氮或干冰 - 乙醇浴快速冷冻（1-2 分钟内降至 - 80℃ 以下），冻结后再转移至 - 80℃ 冰箱； ③-80℃ 低温保存，最大限度降低细胞代谢和冰晶形成对细胞膜的损伤，通常能稳定保存 6-12 个月（不同菌株略有差异），保存期间保证温度稳定，避免反复冻融；
分定位在膜上的DNase，有利于双链环状DNA分子的吸收。此时，再加入含有待转化的DNA样品和聚乙二醇的等渗溶液，均匀混合。通过离心除去聚乙二醇，将菌体涂布在特殊的固体培养基上，再生细胞壁，最终得到转化细胞。这种方法不仅适用于芽孢杆菌和链霉菌等革兰氏阳性细菌，也对酵母菌、霉菌甚至植物等真核细胞有效。只是不同种属的生物细胞，其原生质体的制备与再生的方法不同。1.1.3电穿孔驱动的完整细胞转化电穿孔（Electroporation）是一种电场介导的细胞膜可渗透化处理技术。受体细胞在电场脉冲的作用下，细胞
（如 Cas9）（图 2）,Cas9 能够将该序列进行切除（图 3）。正是基于细菌的这种后天免疫防御机制，CRISPR/Cas9 技术应运而生，从而使科学家们利用 RNA 引导 Cas9 核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点（如 NHEJ 非同源性末端接合) (图 4) 进行修饰。为什么要电转？CRISPR 革命已经开始，将 CRISPR 结构导入特定细胞 (如干细胞、神经细胞、造血细胞、受精卵, 等等) 用普通地方法往往很困难。电穿孔技术可使这些细胞在精确的电脉冲作用下，在细胞膜上形成瞬时的空隙
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