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2年
- 英文名：
pKillerRed-Mem
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pKillerRed-Mem细胞膜定位质粒
别称: pKillerRed-Mem
质粒属性
质粒简介
pKillerRed-mem质粒是一个哺乳细胞红色荧光定位于细胞膜的质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4787 bp ds-DNA circular SYN 17-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pKillerRed-mem.dna
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4787)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4787
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 591..671
/label=MCS
/note="multiple cloning site"
misc_feature 679..738
/label=mem
misc_feature 739..1452
/label=KillerRed
polyA_signal 1575..1696
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1703..2158)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2185..2289
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2291..2648
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2499..2634
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2683..3477
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3709..3756
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4085..4673
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc gcgggcccgg
661 gatccaccgg tcgccaccat gctgtgctgt atgagaagaa ccaaacaggt tgaaaagaat
721 gatgaggacc aaaagatctc cgagggcggc cccgccctgt tccagagcga catgaccttc
781 aaaatcttca tcgacggcga ggtgaacggc cagaagttca ccatcgtggc cgacggcagc
841 agcaagttcc cccacggcga cttcaacgtg cacgccgtgt gcgagaccgg caagctgccc
901 atgagctgga agcccatctg ccacctgatc cagtacggcg agcccttctt cgcccgctac
961 cccgacggca tcagccattt cgcccaggag tgcttccccg agggcctgag catcgaccgc
1021 accgtgcgct tcgagaacga cggcaccatg accagccacc acacctacga gctggacgac
1081 acctgcgtgg tgagccgcat caccgtgaac tgcgacggct tccagcccga cggccccatc
1141 atgcgcgacc agctggtgga catcctgccc aacgagaccc acatgttccc ccacggcccc
1201 aacgccgtgc gccagctggc cttcatcggc ttcaccaccg ccgacggcgg cctgatgatg
1261 ggccacttcg acagcaagat gaccttcaac ggcagccgcg ccatcgagat ccccggccca
1321 cacttcgtga ccatcatcac caagcagatg agggacacca gcgacaagcg cgaccacgtg
1381 tgccagcgcg aggtggccta cgcccacagc gtgccccgca tcaccagcgc catcggtagc
1441 gacgaggatt aaagcggccg cgactctaga tcataatcag ccataccaca tttgtagagg
1501 ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg
1561 caattgttgt tgttaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca
1621 tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac
1681 tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta
1741 aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat
1801 aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca
1861 ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc
1921 ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta
1981 aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg
2041 gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg
2101 gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca
2161 ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat
2221 tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa
2281 aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa
2341 agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa
2401 ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
2461 attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca
2521 gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg
2581 ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct
2641 tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga
2701 ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa
2761 cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt
2821 ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg
2881 ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa
2941 gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac
3001 cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt
3061 gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact
3121 cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg
3181 ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg
3241 acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc
3301 atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt
3361 gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc
3421 gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg
3481 ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg
3541 attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct
3601 ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct agggggaggc
3661 taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa
3721 gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg
3781 gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt
3841 ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg
3901 gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat actttagatt gatttaaaac
3961 ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa
4021 tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat
4081 cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc
4141 taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg
4201 gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc
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4561 gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct
4621 gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca
4681 gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc
4741 ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc catgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pKillerRed-Mem细胞膜定位质粒
别称: pKillerRed-Mem
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞质粒；哺乳报告质粒；荧光定位质粒 |
| 质粒大小: | 4787bp |
| 质粒标签: | C-mem，C-KillerRed |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 亚细胞定位 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 红色 |
质粒简介
pKillerRed-mem质粒是一个哺乳细胞红色荧光定位于细胞膜的质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4787 bp ds-DNA circular SYN 17-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pKillerRed-mem.dna
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4787)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4787
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enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 591..671
/label=MCS
/note="multiple cloning site"
misc_feature 679..738
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/note="SV40 polyadenylation signal"
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/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2185..2289
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2291..2648
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2499..2634
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2683..3477
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3709..3756
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
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3361 gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc
3421 gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg
3481 ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg
3541 attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct
3601 ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccaccct agggggaggc
3661 taactgaaac acggaaggag acaataccgg aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa
3721 gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg
3781 gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt
3841 ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg
3901 gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt actcatatat actttagatt gatttaaaac
3961 ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa
4021 tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat
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4261 acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg
4321 ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2976/pENTR223-RTN4R人源基因质粒 |
| P2977/pENTR223-HTR3A(19-1455bp1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P2978/pENTR223-IFNGR1人源基因质粒 |
| P2979/pENTR223-ALG10人源基因质粒 |
| P2980/pENTR223-OSBPL2人源基因质粒 |
| P2981/pENTR223-CBLC-T1237C人源基因质粒 |
| P2982/pENTR223-CDK16人源基因质粒 |
| P2983/pENTR223-GALK2人源基因质粒 |
| P2984/pENTR223-CASP2(1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P2985/pENTR223-AKAP17A(2点突变）人源基因质粒 |
| P2986/pENTR223-CEP57L1人源基因质粒 |
| P2987/pENTR223-ZNF556人源基因质粒 |
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