pCDNA3.1-Myc-BioID2-MCS 哺乳表达质粒

【交流】构建ShRNA表达质粒咋就那么难？

到医院实习之前，我有幸跟随我的恩师，利用课余时间做了两年多的基础科研。从不懂规矩到渐入佳境，期间学习了很多东西，在此感谢我的恩师！ 我们是生物化学教研室，这两年的时间里我做了很多生化方面的实验。像细菌培养、细胞培养、PCR、western-blot、MTT测细胞增殖能力，这些实验都有商品化的试剂和推荐的操作方法，做起来，难度并不大。唯独让我感到苦恼的就是ShRNA表达质粒的构建这部分，它耗费了我们很多的精力，虽然最终取得了成功，也发表了论文。但是显然，这个实验的可重复性并不

更快克隆出重组表达质粒

比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那真是不知道要猴年马月才能有人类基因组测序图谱，更难以进行

瞬时、高产量的哺乳动物表达

哺乳动物表达系统是适用于生成具有天然结构和活性的哺乳动物蛋白的首选表达平台，可以实现最高水平的翻译后加工，使蛋白质获得最佳功能活性，适合在最类似生理学的环境中研究特定蛋白质的功能。它常用于抗体和治疗性蛋白质以及人类功能细胞分析的蛋白质表达。 和稳定表达相比，哺乳动物瞬时表达系统可实现灵活且快速的蛋白质生产，可以在 1-2 周内生成大量蛋白质，适用于人或其他哺乳动物蛋白的表达，和大肠杆菌、酵母或昆虫细胞等宿主表达系统相比，可实现更天然的折叠和翻译后修饰——包括糖基化（图 1）。 图 1、哺乳