pCDNA3.1-P53-N-GST人源基因质粒

【原创】表达载体的选择及构建方法

  表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强

核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达

非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色

细胞自噬发生与检测

(RabS)作用下与溶酶体融合形成自噬溶酶体的过程，有些溶酶体相关蛋白也参与了其中，包括 LAMP1、LAMP2、UVRAG (紫外线抵抗相关肿瘤抑制基因）。而在降解阶段自噬体蛋白也发挥了重要作用，如 Atg22、Atg12、Atg15、Atg1、Atg13 等。细胞自噬的调节是一个多步骤的极其复杂的过程，目前机制尚未完全掌握，已知它主要是通过mTOR 信号通路、Beclin-1 信号通路、P53 信号通路三条途径来进行调控的。 1） mTOR 信号通路：mTOR 是是一个丝/苏氨酸