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400
- 英文名:
RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
- 保质期:
2年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
置于室温
- 规格:
100ml
特别提示:包括RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)
英文名称:RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
产品货号:MT0065
产品规格:100ml
对目的蛋白进行检测分析时,总蛋白的提取至关重要,如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败,如:信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液,才能最大程度地保证后续实验的成功。Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer对细胞有一定的裂解能力,能获得较多的胞浆蛋白,而对细胞核的裂解能力有限,不能完全裂解细胞核,因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验。
产品特点:
1.可很好的释放胞浆蛋白,部分释放膜蛋白和核蛋白。
2.经Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer,核蛋白与DNA还紧密结合在一起,离心后会造成核蛋白的丢失。
3.对于膜蛋白,Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破坏力小,不能使膜蛋白与膜充分分离,故离心后造成膜蛋白的丢失。
图:用Western Blot RIPA Lysis Buffer(货号:MT0066)和Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer(货号:MT0065)分别提取核蛋白PPARγ和膜蛋白PLD-1,上样量分别为40μg和10μg总蛋白,ECL发光液显色。A/C泳道为Western Blot RIPA Lysis Buffer,B/D泳道为Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer。由此图比较分析表明Western Blot RIPA Lysis Buffer能更充分的释放核蛋白和膜蛋白,从而获得更强的信号。
储存条件:置于室温阴凉处,可保存2年。
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文献和实验或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
紫叶竹韵 做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链
一、原理: 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比,免疫
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