琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)

特别提示：包括琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)
英文名称：Agarose gel DNA column Recovery Kit
产品货号：BTN60202
产品规格：50次

本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA反应体系中回收的DNA片段，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。

产品特点：
1.高效，回收效率最高可达90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关)。
2.快速，整个过程只需要十余分钟。
3. 回收DNA的范围为50bp－40Kb(但效率各不相同)。
4. 纯度高，本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR登等多种分子生物学实验。
5. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
6. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。

试剂盒组成：

成分	规格
通用溶胶液	25ml
通用洗柱液	50ml
离心吸附柱	50套
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期为一年。

使用方法：
1. 对胶回收：切取含DNA片段的琼脂糖凝胶(100mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5mL塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg琼脂糖凝胶需要加入300μL-500μL通用溶胶液)。
 PCR回收：直接在PCR反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。如果PCR反应中使用了石蜡，需要预先去除。
2. 50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟。
 注意：静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。若一次加不完，可分两次加入并离心。
4. 12000～15000g离心1分钟，倒掉收集管中的液体。
5. 加入0.7-0.8mL通用洗柱液于离心柱中，室温静置2分钟。
6. 12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
7. 12000～15000g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
8. 将离心柱置于一新的干净的塑料离心管(自备)中，加入30-100μl DNA洗脱液2.0于离心吸附柱硅胶膜的中央，静置3分钟。
9. 12000～15000g离心1分钟。
10.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。

注意事项：
1.电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2。回收效果为SuperBuffer-2最好，TAE次之，TBE最差。详细见SuperBuffer-2产品介绍。
2. 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。
3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100mg琼脂糖凝胶为宜。
4. 如果在五分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。
5.胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
6. 洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
7. 增大DNA洗脱液2.0使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液2.0可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。

除了琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附),，我公司还供应以下相关产品：



名称：DNA碱性胶上样液
货号：BTN101222
规格：1.5mL
本品是6×的DNA碱变性琼脂糖电泳上样液，含有碱溶液、助沉剂、染料等成分。

产品特点：
1. 即开即用，不需要制备各种溶液。
2. 使用简单，电泳时，先将DNA样品与本上样液1：5混合即可直接上样。
3.还可以用于DNA碱变性琼脂糖电泳。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)
货号：BTN140234
规格：100μL
SYBR Green II染料是一种高敏感的核酸染色试剂，可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。不传统的EB等染料相比，SYBR Green II染料具有灵敏度更高，低毒安全，可用于杂交前RNA质量的检测而不影响的转膜等显著优点。

产品特点：
1. 灵敏度高，信噪比高，样品荧光信号强，背景信号低。可检测出100pg RNA或者单链DNA。不EB相比，SRBR Green II -RNA 复合物所激发的荧光是EB-RNA 复合物激发荧光的7倍。在变性琼脂糖/尿素胶等条件下，SYBR Green II的灵敏度但仍高于EB，使用300nm 透射光显影，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。
2. 操作简单，无须脱色或冲洗。使用方便，丌影响其它修饰酶作用。完全可以代替银染，同时还兊服了银染实验过程复杂、操作繁琐、费时的缺点。
3. SYBR Green II 丌是特异性的结合RNA或者DNA 单链，其对单链的结合效率是双链的约2倍。不其他大部分核酸染料丌同，SYBR Green II 不RNA 结合的荧光量子产率和荧光范围高于不DNA 结合。
4.荧光范围广，可使用多种成像设备观测。最大激发波长在497nm处，次激发波长在245nm 附近。发射波长在520nm处产生。
5.适用范围广，可适用于多种电泳分析、DGGE和SSCP 及RNA 质量分析实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
SYBR Green II染料检测核酸时即可用于预染也可电泳后染色。

1.预染实验
 取1μL 贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀，再加入1ml的6×loading buffer上样缓冲液混匀(此时溶液为1：2000 稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。
2.电泳后染色
a.电泳后，在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而丌要在玻璃器皿中，因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。
b.染料取出后室温放置，恢复室温后简单离心混匀。
c.染色液使用1×TBE缓冲液进行1：10，000 稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶，用1×TBE做1：5000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高，所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释，以克缓冲液中残存的杂质产生背景，影响实验结果。注意：为提高染色的灵敏度，需要保证缓冲液的PH 值7.5-8 之间。
d. 把胶放在塑料的染色容器中，加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来，因为本产品复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时丌会猝灭。
e.在室温下轻轻摇晃凝胶。聚丙*酰胺凝胶的最佳染色时间是10-40分钟，琼脂糖凝胶的最佳染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低，凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8℃ 避光保存，可以重复使用3-4次。
 注意：SYBR Green II RNA染色液丌影响RNA 向膜上的转移和northern中的后续实验。
3.染色胶显色和成像
 本产品所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射，通过Wratten 15滤光片检测。注意：由于荧光本底较低，所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。