WB检测试剂盒（选配二抗、PVDF膜及相关缓冲液、ECL试剂

蛋白免疫印迹（Western Blot）技术手册

. 底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺 ，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。 3．简略步骤 4. 蛋白样本提取制备 蛋白样品制备是Western Blotting的第一步，更是决定WB成败的关键步骤，总体原则和注意事项： （1）尽可能提取

Western blot 实验技巧精要

和二抗就不会被膜上残留的 TBS-T 稀释了。 6. 曝光 当电泳图上的条带不够好时，曝光相关参数也是经常被认为是需要调整的部分。小编依然认为，曝光不是关键的步骤，前面做好了，曝光是很简单的。小编用的是 ECL 发光液曝光法。这种方法最需要注意的就是 ECL 要在条带上分布均匀。小编用的是普通自封袋，将膜放在一片自封袋上，加上发光液后，再盖上一片自封袋，用手指赶一下，发光液就会比较均匀，效果不错。 以上就是小编认为 WB 实验中最需要注意的部分，相信做好以上内容，做

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

：蛋白质样本和生物素标记的蛋白marker标准经SDS-PAGE后转于印迹膜上，然后经一抗→HRP 标记的二抗→HRP催化LumiGLO试剂发生反应并产生荧光→显影于X-光片上。其基本原理如下图： 3.1 主要试剂配制 10×转移缓冲液(transfer buffer)：30.3 gTris-Base，144.1 g Glycine，500 ml三蒸水，振荡混匀后，定容至1000 ml，4℃备用。用时用0.1 M磷酸缓冲液即1×PBS和甲醇稀释至1倍，使甲醇的终浓度