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文献和实验PCR 扩增靶 DNA;②将特异的 PCR 扩增产物变性,而后快速复性,使之成为具有一定空间结构的单链 DNA 分子;③将适量的单 链 DNA 进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;④最后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析结果。若发现单链 DNA 带迁移率与正常对照的相比发生改变,就可以判定该链构象发生改变,进而推断该 DNA 片段中有碱基突变。该方法简便、快速、灵敏,不需要特殊的仪器,适合临床实验的需要. 但它也有不足之处. 例如,只能作为一种突变检测方 法,要最后确定突变的位置和类型,还需进一步
一、目的 了解聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的基本原理和操作技术。二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶,是由丙烯酰胺单体和少量交联剂在催化剂和加速剂的作用下发生聚合反应而制得的。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构,其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度来加以控制。一般分离蛋白质选用7.5%聚丙烯酰胺凝胶,分离比较大的分子,如核糖体核酸时则用2.5%凝胶。
SDS-PAGE电泳主要利用聚丙烯酰胺 的分子筛效应分离蛋白质和核酸,SDS-PAG蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质。 几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-Page 电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论: Q:SDS-PAGE电泳 的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二
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