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- 百奥莱博
- BTN160686K-JQG
- 北京
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
300
- 英文名：
TA Cloning Kit(Resistance to Kanamycin)
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
25次
特别提示：包括零背景TA克隆试剂盒(Kan抗性)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：零背景TA克隆试剂盒(Kan抗性)
英文名称：TA Cloning Kit(Resistance to Kanamycin)
产品货号：BTN160686K
产品规格：25次
本产品是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。
产品特点：
1. 高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2. 适用于具有A尾巴的DNA片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 转化时只需要37℃10分钟复苏即可涂盘，免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
6. 本试剂盒按10μl标准反应体系。
7. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择（BTN160686A是含Amp抗性TOPO载体，BTN60686K是含Kan抗性TOPO载体）。
产品组成：
| 组分 | 编号 | 规格 |
| TOPO-Kan载体 | BTN160686K | 25μl |
| 连接缓冲液 | BTN160686B | 25μl |
| 超纯水 | BTN100935 | 1mL |
保存条件：-20℃，有效期一年。
自备试剂：DNA插入片段、感受态细胞、SOC或LB培养基和培养皿（含抗菌素和不含的）
使用方法：
1. PCR扩增或酶切回收DNA插入片段。如果是PCR制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用Taq系列的DNA聚合酶。
2. 电泳检测并相对定量PCR片段或酶切回收片段（跟DNA marker比较）。并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：
| 插入片段长度 | 最佳用量 |
| 100-1000bp | 20-50ng |
| 1000-2000bp | 50-100ng |
| 2000-5000bp | 100-200ng |
3. 在一个干净的塑料离心管中，室温下（不要放在冰上）设置如下连接反应体系：
| 加入物 | 加入量 |
| 纯化后的PCR产物 | 不超过8μl |
| TOPO-Kan载体 | 1uL |
| 连接缓冲液 | 1uL |
| 超纯水 | 补到10uL |
注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μl，否则PCR体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温（20-30℃）放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μl连接液加到50-100μl刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5×10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2 Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μl不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μl涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Kan的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2 Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μl不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μl涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Kan的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
除了零背景TA克隆试剂盒(Kan抗性),，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN150801 | 大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞 | 10*100μL |
| BTN81221 | 大肠杆菌HB101化学感受态细胞 | 0.1mL*10 |
| BTN130511 | 大肠杆菌JM110化学感受态细胞 | 10*100μl |
| BTN80701 | 大肠杆菌TG1化学感受态细胞 | 0.1mL*10 |
| BTN80806 | 大肠杆菌TOP10化学感受态细胞 | 0.1mL*10 |
| BTN140376 | 大肠杆菌XL2-Blue感受态细胞 | 10*100μl |
| BTN140389 | 酿酒酵母Y187感受态细胞 | 10×100μL |
| BTN120696 | 土霉素盐酸盐溶液 | 10mL |
| YT443 | pGL6-TA报告基因质粒 | 1μg |
| YT480 | N端HA标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| ALH359 | 一步法定向表达试剂盒 | 20次 |
| ALH424 | 强效EB去除剂 | 50次|100次 |
| SY0014 | BL21 (DE3)化学感受态细胞 | 100μl×10管 |
| SY0284 | 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点) | 20T |
| JN0101 | Simple Cloning T载体(pSC-T) | 20次 |
| QN1055 | 鲑鱼精DNA(10mg/ml) | 1ml |
| CZ036 | T4 DNA连接酶(400U/μL) | 2万U/10万U |
| MQ0034 | EPI400化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0052 | F-BL21(DE3)化学感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
| MQ0066 | Y187酵母感受态细胞 | 10×100μl/50×100μl |
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