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文献和实验流式课堂 | 细胞带有 GFP 荧光时，如何进行流式凋亡分析？
、FITC、EGFP 等。 在这里，比较推荐的荧光组合是 Annexin-V APC/7AAD。APC 的激发/发射波长为 650/660，7AAD 的激发/发射波长为546/650，可以很好地降低 GFP 带来的干扰，使结果分析更加准确。 二、如何分析结果 在选择了合适的试剂盒进行上机检测后，恰当的结果分析，对于数据的完美呈现，也是至关重要的。以前文数据为例，我们来看看如何分析： 01 设置 FSC/SSC 圈门 根据大小及颗粒度，圈出需要分析的细胞群体，排除碎片及黏连体的影响； 02 调整荧光补偿
较暗的染料。为了保证每个通道的分辨率可接受，我们需要合理搭配抗原和染料。一般来说，较暗的染料，如FITC、PerCP等，优先分配给表达量高的抗原，而PE、APC、PerCP/Cy5.5、PE/Cy5等较亮的染料可以分配给表达量低或者分辨率要求比较高的抗原。合理配色的最终结果是让不同表达水平的抗原检测到的信号尽量均衡。 3) 保证搭配荧光染料的质检发射光谱重叠度尽量小 如前所述，当两种荧光染料的发射光谱重叠时，它们的荧光信号将会互相干扰，给数据分析带来麻烦。虽然荧光补偿技术
性群且信号强度不低于样本；若细胞靶标表达弱，可用补偿微球替代。关键的是，补偿调节与样本检测的电压设置必须严格一致，任何电压变动都需重新补偿。最后，单染管的制备流程（如固定、破膜等）须与样本完全同步，以排除操作差异对荧光信号及补偿数值的影响，确保数据准确。 哪些染料不建议同时使用 流式实验中光谱重叠难以完全避免，虽可通过优化配色和补偿减轻，但部分染料组合需格外谨慎。如APC与PE-Cy5、BV711与AF700等重叠较强，调节补偿时需特别注意；而FITC与AF488、APC与AF647等光谱极近
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