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107/mL, 1 mL
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文献和实验光染料在同一激光激发的染料中选择时,优先选择亮度高的染料,以保证最佳分辨率。常用的高亮度染料有PE、PE/Cy5、PE/Cy7、APC、PerCP/Cy5.5、AlexaFlour 647等,但是并不是说染料亮度高,在您的流式细胞仪上就能获得较好的信号,这还需要您的仪器的配备合适的激光、滤光片和探测器。 2) 平衡抗原表达水平和染料荧光亮度 在单色流式检测实验中,我们通常会选择亮度最强的几种染料,如PE、APC等等。但是,在多色流式检测时,有时因为颜色的限制不得不用到一些亮度
流式课堂 | 细胞带有 GFP 荧光时,如何进行流式凋亡分析?
、FITC、EGFP 等。 在这里,比较推荐的荧光组合是 Annexin-V APC/7AAD。APC 的激发/发射波长为 650/660,7AAD 的激发/发射波长为546/650,可以很好地降低 GFP 带来的干扰,使结果分析更加准确。 二、如何分析结果 在选择了合适的试剂盒进行上机检测后,恰当的结果分析,对于数据的完美呈现,也是至关重要的。以前文数据为例,我们来看看如何分析: 01 设置 FSC/SSC 圈门 根据大小及颗粒度,圈出需要分析的细胞群体,排除碎片及黏连体的影响; 02 调整荧光补偿
,分别检查各项单色补偿值,并更改增益值。3. 获取单色补偿值(采用 VersaComp 微球,产品目录号:B22804)。4. 创建新实验。5. 导入先前针对 BV421、BV510、BV605、BV650、FITC、PE、PE-Cy7、APC、AF700 以及 APCAF750 创建的补偿设定值。6. 创建以下图区:CD45-SSC,圈选 CD45+ 细胞;FSC-SSC,圈选淋巴细胞;FSC-A-FSC-W,圈选单细胞;被排除细胞与 CD7,圈选 exclusion -/CD7+ 细胞;CD
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