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科研
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鼠/人/其它
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上皮样/成纤维样/其它
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常温运输/干冰运输
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- 生长状态：
贴壁/悬浮
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RAW264.7
RAW264.7;小鼠巨噬细胞瘤须知： 烜雅生物发布
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ATCC货号：RAW264.7;小鼠巨噬细胞瘤
1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
2.液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24◦C保存。
3. 培养用液pH对细胞生长的影响
由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。
但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
4.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为：
（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；
（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。
（3）0.25% 胰蛋白酶
溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。
多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。
购买上海烜雅生物细胞注意事项（烜雅生物）发布
一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：
1. 未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。
2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：
1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；
2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；
3) 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。
三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
（5）视具体情况而定。
五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（6）视具体情况而定。
六、售后服务政策
细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。
质量可靠，售后有保障
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1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
2.液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24◦C保存。
3. 培养用液pH对细胞生长的影响
由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。
但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
4.细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为：
（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；
（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。
（3）0.25% 胰蛋白酶
溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。
多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。
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一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：
1. 未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。
2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：
1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；
2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；
3) 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。
三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
（5）视具体情况而定。
五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（6）视具体情况而定。
六、售后服务政策
细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。
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| AN3 CA | 人 | 人子宫内膜腺癌细胞（AN3 CA） |
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| AR42J | 胰腺细胞AR42J | |
| AsPC-1 | 人 | 人转移胰腺腺癌细胞 |
| B16 | 小鼠 | 小鼠黑色素瘤细胞 |
| B6YH4 | 鼠 | 杂交瘤细胞（B6YH4）枝原体阳性 |
| B82 | 鼠 | 鼠细胞系（B82） |
| B95-8 | 美洲绒猴 | 绒猴EBV转化的白细胞 |
| BALB/3T3 clone A31 | 小鼠 | 小鼠胚胎成纤维细胞 |
| Bcap-37 | 人 | 人乳腺癌细胞Bcap-37 |
| Bel-7402 | 人 | 人肝癌细胞系(Bel-7402) |
| BEL-7404 | 人 | 人肝癌细胞 |
| BEL-7405 | 人 | 人肝癌细胞 |
| Bewo | 人 | 人绒毛膜肿瘤细胞系(Bewo) |
| BGC-823 | 人 | 人胃腺癌细胞（低分化） |
| BHK-21 | 鼠 | 叙利亚仓鼠肾细胞系（BHK-21） |
| BI U－87 | 人 | 膀胱癌细胞（BI U－87） |
| BRL | 大鼠Buffalo | 大鼠肝细胞 |
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| BT-474 [BT474] | 人 | 人乳腺导管癌细胞 |
| BT-549 | 人 | 人乳腺管癌细胞 |
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| C-33A | 人 | 人子宫癌细胞C-33A |
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| RAW264.7;小鼠巨噬细胞瘤 CCD-1095Sk | 人 | 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞 |
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文献和实验相关实验
RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下：消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度以50ml培养瓶为例：1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次；2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml,消化37℃约2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加D-HANKS 漂洗两次；3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞
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