游离生物素测定培养基

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

体染色步骤中去除游离染料的第 4、5 步必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。 c、去除游离染料的方法推荐选择 3~10KD 的超滤管，利用其置换溶剂功能去除游离染料。具体步骤和实验参数请咨询超滤管厂商。 d、染料标记外泌体与细胞共孵育的培养条件尽可能使用无血清培养基，以提高细胞对染料标记外泌体的摄取效率，共孵育参考时长为 2 小时。 e、本染料也可用于细胞膜染色，参考剂量染料浓度为 2X10–6 M，细胞浓度为 1X107 cells

如何获得高质量的细胞上清液外泌体？

（DMEM、1640、F12 等） ✘ 此种培养条件细胞处于饥饿状态，会将培养基中的营养物质（包括外泌体）全部消耗掉的，上清液中的外泌体含量低。 4 外泌体专用无血清培养基 ✔ 不含异源外泌体 常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，需要通过预实验摸索。 第二步细胞上清液预处理：获得高质量外泌体预处理也很重要。细胞上清液中有什么物质？除了我们感兴趣的外泌体外，还有少量细胞、细胞碎片、游离蛋白、脂类等。需要做的就是通过差速

专业科普：高质量细胞上清液外泌体如何提取

首先，从细胞的培养过程下手。外泌体来自细胞，因此必须先从源头抓起。大部分的细胞培养过程中都是带有血清的，无论是牛血清、马血清等都是含有异源外泌体的，而我们研究的目标通常是细胞所分泌的外泌体，因此需要尽可能的去除这些异源外泌体的干扰。那么我们需要怎么做呢？ 这里需要了解一个大原则：在细胞正常生长的条件下，尽可能的减少血清外泌体或者不使用血清。方法一，可以通过超速离心的方法去除血清中外泌体。方法二，通过外泌体专用无血清培养基来替代完全培养基，维持细胞