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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2—25℃
- 保质期：
一年
- 英文名：
Free Biotin Assay Medium
- 库存：
50
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
250g
英文名称：Free Biotin Assay Medium
产品规格：250g
产品用途： 用于婴儿食品和乳粉中游离生物素测定
游离生物素测定培养基用途用于婴儿食品和乳粉中游离生物素测定
1、 液体培养基:把培养基配好，液体一般5mL就装试管，50mL-100mL就装到100mL的三角瓶中，高温高压灭菌后待用。和细胞培养不一样的地方就在于，三角瓶和试管由于装了培养基要灭菌，瓶塞需要做棉塞或用膜等透气的东西封口。这些东西直接找有做过的实验室去弄点就行了，自己现做什么的也怪麻烦的。
游离生物素测定培养基固体培养基:在液体培养基中添加一定浓度的琼脂，一般是100mL装瓶，或者是200mL装瓶（装500mL的三角瓶），灭完菌后，在培养基温度降到一定程度，培养基还呈溶液状态的时候，就在超净台加抗生素倒平板。不过别太凉，不然琼脂就凝固成块块了。当然，灭好菌后，也可以等到要用的时候再倒平板，倒之前微波炉加热，溶解琼脂，冷却到一定温度再倒就行。（建议如果以前从来没弄过固体培养基，也找个人替你操作几次）这部分的内容，可以去找一本本科的微生物实验手册看看就行。
2、冻干粉比较好保存，所以在培养基全部准备好之前不用去管冻干粉，扔冰箱就行。都准备就绪以后，直接用500-1000uL的培养基溶解干粉，浓度高，接活率高。然后有几种方法可以选择：
1）.直接将溶好的菌取5-10uL加入到5mL 液体培养基（已经加了抗性）中，37C摇床培养。根据你的冻干粉保存的时间，一般7,8个小时就能看见有没有长了。
2）.为了防止接菌量太少，导致菌体不生长，可以取50-100uL的菌液加入到50mL液体培养基中，37C摇瓶培养，这个按说应该会长得比较快一点，因为通气量大。所以你可以都接上，看情况。
3）.还有为了防止污染，会直接取菌液在固体培养基上划线，这样长出来的是单菌落，根据菌落大小和形态，就可以避免取到污染的菌体。但是这种方法风险最高，因为接菌量小，如果菌体活力稍弱，就容易完全不长。
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文献和实验体染色步骤中去除游离染料的第 4、5 步必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。 c、去除游离染料的方法推荐选择 3~10KD 的超滤管，利用其置换溶剂功能去除游离染料。具体步骤和实验参数请咨询超滤管厂商。 d、染料标记外泌体与细胞共孵育的培养条件尽可能使用无血清培养基，以提高细胞对染料标记外泌体的摄取效率，共孵育参考时长为 2 小时。 e、本染料也可用于细胞膜染色，参考剂量染料浓度为 2X10–6 M，细胞浓度为 1X107 cells
（DMEM、1640、F12 等） ✘ 此种培养条件细胞处于饥饿状态，会将培养基中的营养物质（包括外泌体）全部消耗掉的，上清液中的外泌体含量低。 4 外泌体专用无血清培养基 ✔ 不含异源外泌体 常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，需要通过预实验摸索。 第二步细胞上清液预处理：获得高质量外泌体预处理也很重要。细胞上清液中有什么物质？除了我们感兴趣的外泌体外，还有少量细胞、细胞碎片、游离蛋白、脂类等。需要做的就是通过差速
首先，从细胞的培养过程下手。外泌体来自细胞，因此必须先从源头抓起。大部分的细胞培养过程中都是带有血清的，无论是牛血清、马血清等都是含有异源外泌体的，而我们研究的目标通常是细胞所分泌的外泌体，因此需要尽可能的去除这些异源外泌体的干扰。那么我们需要怎么做呢？ 这里需要了解一个大原则：在细胞正常生长的条件下，尽可能的减少血清外泌体或者不使用血清。方法一，可以通过超速离心的方法去除血清中外泌体。方法二，通过外泌体专用无血清培养基来替代完全培养基，维持细胞
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