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- P5082
- 2025年06月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃&-80℃
- 保质期：
3个月~12个月
- 英文名：
pMETB质粒
- 库存：
41
- 供应商：
上海禾午生物科技有限公司
- 规格：
2ug冻干粉&300ul甘油菌
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文献和实验Pick colonies into 0.5ml of SD-Leu (or other appropriate SD medium)Vortex for 1minLeave to grow O/N for 18-24h at 30℃, 230-250rpm (best in 5ml bijou)Spin yeast culture at 13,000rpm for 5 min (microfuge)Pour off supernatant carefully and resuspend
问：想从酵母提取质粒，转化大肠杆菌，按分子克隆的方法，可能都线性化了，转化率为0，请问有什么好的办法？答：以下是我的方法，曾提过数百个，好像转化效率还可以,基本上都提出来了。个人体会是Lyticase的活性要好，而且涡流混匀这一步好像要尽量充分吧，u see，酵母质粒所以不好提，就是因为酵母细胞有很厚的细胞壁，再加上酵母质粒拷贝数目多少的问题，所以破壁一定要充分。其次吗？感受态细胞的状态也会有很大的影响……再有，如果担心酵母细胞的活性问题，也可以活化一下再提，不过好象我的实验中这项不是问题
问1：在提取酵母质粒的时候，有一步用到玻璃珠，谁能告诉我玻璃珠的作用，而且在哪能买到玻璃珠，贵不贵？谢谢！答1：在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。答2：玻璃珠SIGMA有，可以问问代理。也可以使用蜗牛酶裂解法破酵母细胞壁法。问2：能给我具体说说蜗牛酶裂解法的步骤吗？谢谢。另外你知道玻璃珠的作用吗？它应该是吸附酵母染色体DNA吧，而不是质粒DNA。你用过没有，它贵
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