人间充质干细胞成软骨诱导试剂盒培养基

货号	产品名称	目录价（元）
FY200006	人间充质干细胞成骨诱导试剂盒	1080

 

货号	产品名称	目录价（元）
FY200007	人间充质干细胞成脂诱导试剂盒	1380

 

货号	产品名称	目录价（元）
FY200008	人间充质干细胞成软骨诱导试剂盒	1780

产品特点：

小包装。采用100ml装，使用更节约、更方便；

简约装，升级产品、组成更简洁、操作更方便；

更稳定，产品系统误差更小，使用更稳定。

适用研究：

人间充质干细胞分化能力鉴定，软骨再生医学与组织工程研究，人间充质干细胞产品质量控制，材料学研究，发育研究

适用细胞：

人骨髓、脂肪、脐带、羊膜间、牙髓、脐带血间充质干细胞，其他组织来源的人间充质干细胞。大鼠、犬、小鼠等其他物种来源的间充质干细胞。

诱导周期：1-4周

判定方法：阿利新蓝染色

产品使用效果图：

  

 

1、成骨诱导，诱导第7天可见明显钙沉积出现、诱导10-14天基本达到足量的钙结节；
2、成脂诱导，诱导3天便可见小脂肪滴出现，诱导7-12天可完成鉴定，满足拍照需求；
3、成软骨诱导，按照说明书操作，方法简单，可进行切片染色和直接染色鉴定，建议使用切片染色。

特别提示：
该系列试剂盒适用于人间充质干细胞分化能力鉴定，提供染色试剂。若选用其他指标鉴定，如钙含量、脂肪含量、基因表达量等，则需要自备相关试剂。
该系列产品是鉴定使用，若细胞不符合要求，则形成率可能会低、甚至不会出现预期结果。

人间充质干细胞成软骨诱导试剂盒

仅用于科学研究

产品信息
产品名称：人间充质干细胞成软骨诱导试剂盒
货号：FY200008
批号：见包装
存储与有效期：

组分A、E于2-8 ℃避光保存，组分B、C、D于-20 ℃避光保存。所有组分均须避免反复冻融及复温，各组分在所需要的温度下有效期为1年，配制完成的预混液于2-8 ℃保存，有效期1个月，完全培养基现配现用，2-8 ℃保存不超过72 小时。
适用细胞：
人骨髓间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞、人牙髓间充质干细胞、人脐带血间充质干细胞，其他组织来源的人间充质干细胞。
产品介绍
间充质干细胞（MSC）具有多向分化的潜能，体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目，目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。在多种组织来源和制作方法的MSC药品质量控制中，成骨、成脂、成软骨也是必检指标。
为满足科研和制药对MSC分化能力的鉴定，弗元生物结合多年MSC研究经验优化MSC诱导试剂盒，在稳定性、易用性上大幅改进，采用了独创的小包装。该试剂盒的设计用途，首先，用于鉴定人MSC是否具有成骨分化能力，满足MSC质量控制的要求。其次，在再生医学和组织工程研究中，诱导培养基也可作为除支架以外的培养培养体系。另外，诱导培养基还可用于研究诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、胶原含量检测、免疫组化检测等。
本产品仅适用于科学研究。
操作方法
实验准备
u 试剂配制：
预混液：室温融化添加物B和添加物C，将融化后加入A液，充分混匀，配制成软骨分化培养基预混液。
注意：添加物解冻后旋涡混匀、1000 g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A液后，吸取A液洗涤溶液瓶两次，将洗涤液加入A液中。预混液必须充分混匀，2-8 ℃保存。
诱导完全培养基：取10 ml预混液置于15 ml离心管中，加入一支添加物D，充分混匀制成诱导完全培养基，此液现配现用。1 ml预混液需加入添加物D的量为10 μl。
注意：诱导完全培养基现配现用，2-8 ℃放置不得超过72小时。整个过程须确保无菌操作，各试剂开封前以75%酒精擦拭表面。
u 自备试剂：
l  消化液（0.25%Trypsin-0.04%EDTA或其他 ）
l  磷酸盐缓冲液（DPBS）
l  MSC完全培养基
l  4%中性多聚jiaquan溶液
注意：若MSC完全培养基不含血清，则需要准备胰酶抑制剂。MSC消化极易过度，建议稀释0.25%胰酶消化液一倍，且严格控制消化时间。
操作步骤
1.      准备所需诱导分化的MSC，当细胞融合达85%左右时，用消化液消化细胞，细胞沉淀用成软骨诱导预混液重悬。
2.      220 g离心5 分钟，沉淀以预混液重悬，细胞密度约2×10⁶ cells/ml，再次离心，弃上清。
3.      沉淀以成软骨诱导完全培养基重新悬浮，调整细胞密度为2×10⁶ cells/ml。
4.      分别取500 μl细胞悬液接种于15 ml离心管中，220 g离心5 分钟。
注意：每管细胞的总数在5×10⁵至1×10⁶之间，一般以1个T25细胞培养瓶接种一个软骨球为佳，细胞数过少形成的软骨团块较小，细胞数过多则可能会分开成块。正常情况下可形成1-2 mm³的团块。离心以细胞聚团为准，可适当调整。离心力过大，软骨球不易悬浮，离心力过小则可能形成软骨球效果不佳。
5.      旋松离心管盖，将离心管轻轻竖直置于37 ℃、5% CO₂培养箱中静置培养。
注意：24 小时内避免摇动细胞沉淀，以确保形成个团块。离心管需使用聚丙烯材质无菌管。
6.      诱导培养24 小时后，轻轻拨动离心管底，使细胞沉淀团块悬浮，重新放回培养箱继续培养。
注意：细胞团块重新悬浮的时间因细胞而定，基本在24-48 小时之间，以细胞团周围有聚拢现象时为准。若细胞团块贴壁较牢固，可用移液器轻轻吹动使其悬浮，注意不要吹散团块。
7.      每2天更换新鲜完全诱导培养基。换液时轻轻吸去旧培养基，每管加新鲜配制的成软骨分化完全培养基500 μl。
注意：换液时动作轻柔，以免吸出细胞团块；诱导完全培养基必须经过复温，否则影响诱导效果。在诱导培养2-3周后会出现大量细胞外基质，富含软骨蛋白多糖和Ⅱ型胶原。
8.      诱导培养14-20天，弃去培养上清，DPBS洗细胞两次，4%中性多聚jiaquan溶液2 ml/管室温固定细胞1小时。
注意：培养结束时或中途可以选择其他检测方法，如基因表达检测等，若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。一般软骨球诱导致密后能进行染色处理，时间在14-20天左右，时间过久可能导致团块内部出现空泡，甚至团块裂开，具体时间请以自己细胞的特性自行确定。
9.      弃去固定液，DPBS洗2次，脱水、石蜡包埋后切片。
注意：脱水包埋可以用擦镜纸包裹后使用自动脱水机脱水、包埋，也可以在原离心管中逐级更换脱水、透蜡的液体，手工包埋。过程中一定注意团块不要丢失。
10.  阿利新蓝染色：将切片进行脱腊和复水，阿利新蓝染液染色30 分钟，流水冲洗5 分钟，脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察、拍照。
注意：染色和制片过程中避免干片，干片后会导致组织形态发生变化，影响观察、拍照效果。根据需要可以选择苏木素复染，不建议复染。
11.  结果判定：按照程序操作完毕，低倍镜下观察可见蓝色着色，该蓝色染色的为酸性粘多糖，说明实验所用的MSC具有成软骨能力。否则，所使用的MSC无成软骨能力。
注意：该鉴定方法和判定标准为定性实验标准，可根据具体情况设置其他判定方法和标准。以上提供的是包埋切片染色的方案，若实验室条件限制，可选择直接对团块进行染色，方法见B9、B10、B11。若试剂盒用于组织工程软骨诱导，可作为除支架材料以外的诱导液使用。
B9.  弃去固定液，DPBS洗团块2次。
B10.              阿利新蓝染色：向团块中加500 μl阿利新蓝染液染色30 分钟。弃染色液，加纯水5 ml摇动清洗5分钟/次，反复洗5次。
注意：染色液中的团块不易看清，务必小心吸去上清，避免样本丢失。
B11.              结果判定：按照程序操作完毕，低倍镜下观察可见深蓝色着色，该蓝色染色的为酸性粘多糖，说明实验所用的MSC具有成软骨能力。否则，所使用的MSC无成软骨能力。

 

弗元生物推出间充质干细胞鉴定相关产品系列，为间充质干细胞研究提供优质的产品与服务。



 

弗元生物，致力于打造具有国际影响力的生物医学品牌。

弗元生物立足于生物科技蓬勃发展的上海，与张江药谷、中科院、三甲医院等生物医学领域的各企事业单位协作紧密，共同为中国生物医学研究贡献力量。公司以干细胞与再生医学研究为核心，业务经营范围辐射到细胞生物学、分子生物学、免疫学等生物医学领域的多个相关学科。

至2019年初，公司有技术服务事业部、再生医学事业部和生命科学事业部三个主要发展部门。目前，在国际期刊杂志发表论文7篇，中文核心期刊发表论文1篇，申请国家发明专利4项，拥有商标9项；生命科学事业部，已经上市科研产品十余项，在研产品数十项；再生医学事业部，具有在研项目多项，包括间充质干细胞治疗缺氧性脑病、再生医学软骨、再生医学骨等，生物人工肝；技术服务事业部，服务了多家企业和科研机构，在再生医学的基础和转化研究上进一步完善了服务体系。