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        间充质干细胞及其培养基

        普诺生生物

        18239

        PromoCell MSC分化培养操作步骤

        一、向神经细胞分化的操作流程

        间充质干细胞及其培养基

        1、将塑料培养器用纤维连接蛋白包被

        根据操作手册,用纤维连接蛋白(C-43050)包被合适的组织培养瓶。使用浓度为10μg/ml。

        2、接种间充质干细胞
        用MSC生长培养基(C-28010)在用纤维连接蛋白包被过的培养瓶中接种培养,接种密度为4000个/cm2。

        3、培养间充质干细胞
        将细胞培养至80%的饱和度,每48小时更换一次培养基。

        4、诱导间充质干细胞
        用MSCU经细胞分化培养基(C-28015)诱导培养,用MSC生长培养基(C-28010)培养剩余的一个样本作为阴性对照。

        5、间充质干细胞的分化培养
        至少培养3天,每48小时更换一次培养基。
        注意:诱导后只要1天就观察到细胞显著的形态学变化。

        6、收获和验证细胞
        MSC来源的神经细胞可以选择性的根据的“神经细胞标记物的检测”来进-步验证细胞的特征。

        二、向成骨分化的操作流程

        间充质干细胞及其培养基

        1、接种充质干细胞

        在24组织培养板中用MSC生长培养基接种间充质干细胞,每接种6x104个MSC(接种密度为3.15x104个/cm2)。

        2、间充质干细胞的生长
        要点:让细胞达到≥100%的密度(24-72小时)。

        3、诱导间充质干细胞
        将其中一份培养的细胞用MSC成骨分化培养基诱导,另一份培养的细胞用 MSC生长培养基培养作为阴性对照。

        4、间充质干细胞的分化培养
        诱导培养14天,每3天更换一次培养基。操作时候小心不要破坏细胞的单层。

        要点:在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒!

        三、向成软骨分化的操作流程

        间充质干细胞及其培养基

        1、接种间充质干细胞

        在96 U型底板中用MSC生长培养基接种间充质干细胞,每接种1x105个MSC。

        2、MSC芽体形成

        在24-48小时内芽体就会自发形成。

        3、诱导间充质干细胞芽体

        将其中一份培养的细胞用MSC成软骨分化培养基诱导,另一份培养的细胞用MSC生长培养基培养作为阴性对照。

        4、诱导得到的间充质干细胞芽体的分化培养

        诱导培养14天,每3天更换一次培养基。操作时候小心不要吸到芽体。

        要点:在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒!

        四、向成脂分化和操作流程

        间充质干细胞及其培养基

        1、接种间充质干细胞

        在24 组织培养板中用MSC生长培养基接种间充质干细胞,每接种6x104个MSC(接种密度为3.15x104个/cm2)。


        2、间充质干细胞的生长

        让细胞达到80%-90%的密度(24-48小时)。


        3、诱导间充质干细胞

        将其中一份培养的细胞用MSC成脂分化培养基诱导,另一份培养的细胞用MSC生长培养基培养作为阴性对照。


        4、间充质干细胞的分化培养

        诱导培养14天,每3天更换一次培养基。操作时候不要破坏细胞的单层。

        要点:在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒!

        五、MSC无分化生长的操作步骤

        用人纤连蛋白溶液进行包被

        将纤维连接蛋白用不含钙和镁的Dulbecco's PBS(C-40232)稀释至10μg/ml,用足量经稀释的纤连蛋白溶液覆盖组织培养皿的表面,以确保有效的包被整个培养表面。室温下将培养皿水平放置60分钟,确保覆盖整个表面后,吸出多余的纤连蛋白溶液后立即使用,或打开培养容器让其暴露在层流台上用气流吹干。已包被过的未使用容器可在4℃条件下最多保存2周。

        按照原代细胞的培养手册进行解冻培养。

        PromoCell MSC DXF培养墓的主要特点:


        间充质干细胞及其培养基

        1、适用于骨髓/脐带/脂肪来源的MSC

        2、在更短的培养时间内细胞扩增更多

        3、细胞倍增速度更快

        4、作简便,基础培养补充剂一次性混合后,即可实现培养

        5、更低的接种密度,4000个细胞/cm2

        6、在细胞传代的整个过程中,都可持免疫表型、多能性及对T细胞的抑制能

        7、无血清、无动物源性,成分已知

        优点:

        1、精确控制MSC的类型,自我增殖或定向分化

        2、更低的使用成本

        3、降低了污染风险

        5、简化注册申报过程

        6、提高患者安全性

        7、批次间差异最小化

        8、无血清、无动物源性,相关风险最小化

        价值定位——传统培养基相比PromoCell MSC DXF培养基的优势

        1、自主配制类:用于细胞扩增的、化学成分明确的DXF培养基,可在维持多能性表面表型的同时减少批间差异,并且节约时间和精力,可使细胞达到您预期的最终状态。

        2、含血清型类:用于细胞扩增的、化学成分明确的DXF培养基,可在维持多能性和表面表型的同时减少批间差异,并且节约时间和精力,可使细胞达到您预期的最终状态。

        3、不含血清型类:DXF即用型培养基简化了细胞培养流程并优化了生产率,在每次传代中,可使细胞的倍增度更高,减少了总成本、时间和污染风险。

        4、无异源培养基类:DXF即用型培养基简化了细胞培养流程并优化了生产率,在每次传代中,可使细胞的倍增度更高。

        FAQ
        1、什么是人纤连蛋白溶液?

        答:它是一种纤连蛋白细胞外基质,其促贴壁性能可以优化PromoCell MSC DXF培养基及补充剂的培养效果

        2、其它纤连蛋白也起作用吗?

        答:是的,但我们不建议将动物源性纤连蛋白用于人体细胞的培养。PromoCell也提供牛纤连蛋白C-43050

        3、需要使用人纤连蛋白溶液对培养容器表面进行预处理吗?

        答:需要,因为PromoCell的MSC DXF培养系统中不含促进细胞贴壁的物质,所以培养前建议使用人纤连蛋白(C-43060)对培养容器表面进行预处理。

        4、你能给我们提供一份MSC培养基和补充剂成分的清单么?
        答:不能,这属于PromoCell的保密条款

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