紫外法蛋白定量试剂盒

紫外法蛋白定量试剂盒优点是：操作迅速、简便，不易受低浓度盐类的干扰；缺点是与标准蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差异较大的蛋白质，准确性较差。样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸会干扰检测结果。

蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白质在270～290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质，其中酪氨酸的大吸收峰为275nm，色氨酸的大吸收峰为280nm，苯丙氨酸的大吸收峰为257nm。在上述波长范围内，蛋白质溶液的吸收值与其浓度呈正比，可作定量测定。

自备材料：
1、 分光光度计或酶标仪
2、 96孔板或离心管
 
操作步骤(仅供参考)：
1、 用去离子水或蒸馏水稀释蛋白稀释液(10×)至1×，即为蛋白稀释工作液。取1支20mg的蛋白标准，加入20ml蛋白稀释工作液，即配制成蛋白标准(1mg/ml)，-20℃保存。
2、 标准曲线法：取若干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。选用1cm的石英比色皿，在280nm处以第1管作为调零点，分别检测各管吸光度，以A280为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取1ml待测蛋白加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
3、 Lowry-Kalckar法(又称280nm和260nm吸收差法)：对于含有核酸的蛋白质，无需制作标准曲线。以蛋白稀释工作液作为调零点，取1ml待测蛋白加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280 和A260。根据经验公式计算出待测样品的蛋白浓度，如果蛋白浓度过高应用蛋白稀释工作液稀释后再行检测。
蛋白质浓度(g/L)=1.45×A280-0.74×A280
4、 Waddell法(又称215nm和225nm吸收差法)：对于蛋白质含量较少的溶液，适用于该法。取若干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。以蛋白稀释工作液作为调零点，取1ml蛋白标准(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A215 和A225。以215nm与225nm吸光度值之差(D=A215-A225)为纵坐标，以蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线，再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线查出未知样品的蛋白质浓度。或者不用制作标准曲线，直接按照如下经验公式计算：
蛋白质浓度(g/L)=144×(A215-A225)。
 
注意事项：
蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白稀释工作液，该液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准液-20℃保存。
待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。