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- JC9650
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- 2025年07月14日
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大量
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
250T/500T
| 规格： | 250T | 产品价格： | ¥65.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500T | 产品价格： | ¥100.0 |
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白质在270～290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质，其中酪氨酸的大吸收峰为275nm，色氨酸的大吸收峰为280nm，苯丙氨酸的大吸收峰为257nm。在上述波长范围内，蛋白质溶液的吸收值与其浓度呈正比，可作定量测定。
自备材料：
1、 分光光度计或酶标仪
2、 96孔板或离心管
操作步骤(仅供参考)：
1、 用去离子水或蒸馏水稀释蛋白稀释液(10×)至1×，即为蛋白稀释工作液。取1支20mg的蛋白标准，加入20ml蛋白稀释工作液，即配制成蛋白标准(1mg/ml)，-20℃保存。
2、 标准曲线法：取若干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。选用1cm的石英比色皿，在280nm处以第1管作为调零点，分别检测各管吸光度，以A280为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
取1ml待测蛋白加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
3、 Lowry-Kalckar法(又称280nm和260nm吸收差法)：对于含有核酸的蛋白质，无需制作标准曲线。以蛋白稀释工作液作为调零点，取1ml待测蛋白加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A280 和A260。根据经验公式计算出待测样品的蛋白浓度，如果蛋白浓度过高应用蛋白稀释工作液稀释后再行检测。
蛋白质浓度(g/L)=1.45×A280-0.74×A280
4、 Waddell法(又称215nm和225nm吸收差法)：对于蛋白质含量较少的溶液，适用于该法。取若干试管或96孔板，如下操作以分光光度法为例。以蛋白稀释工作液作为调零点，取1ml蛋白标准(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀释工作液中，混匀，分光光度计或酶标仪测定A215 和A225。以215nm与225nm吸光度值之差(D=A215-A225)为纵坐标，以蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线，再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线查出未知样品的蛋白质浓度。或者不用制作标准曲线，直接按照如下经验公式计算：
蛋白质浓度(g/L)=144×(A215-A225)。
注意事项：
蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白稀释工作液，该液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准液-20℃保存。
待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗
xungufeng820 各位大侠： 小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！ snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好
大鼠尿微量白蛋白 (ALB) 酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用 ! 预期应用 ELISA 法定量测定大鼠尿液或其它相关生物液体中 ALB 含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 ALB 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 ALB 抗体、 HRP 标记的 亲和素 ，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色
发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
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