天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)
产品简介：
转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏，以心肌含量，肝脏次之，AST能够催化天门冬氨酸和a-酮戊二酸的氨基转移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。


天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏微板法)其检测原理是AST催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，其反应公式如下：

L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸。
二硝-基苯-肼与α-酮酸反应生成相应的二硝-基苯腙，在碱性条件下二硝-基苯腙的吸收光谱有差异，通过酶标仪检测在500-520nm处差异大，以等摩尔浓度计算出丙=酮酸的生成量，进而计算酶的活性。100T该检测试剂盒可检测50个样品(不含标准品)，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管
3、水浴锅或恒温箱
4、96孔板、酶标仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT含量。
2、制作AST标准曲线：取丙-酮酸标准1支，准确加入丙-酮酸标准稀释液1ml，充分混匀，即配制成丙-酮酸标准(100mmol/L)，4℃保存备用。临用前，取适量的丙-酮酸标准(100mmol/L)，按丙-酮酸标准(100mmol/L)：丙-酮酸标准稀释液=1：49的比例混合，即为丙-酮酸标准工作液-丙-酮酸标准(2mmol/L)，按下表制备标准曲线。设定平行检测孔，求平均值。
 混匀，向各管中加入二硝-基苯-肼显色液20μl，37℃孵育20min后加入AST显色基液200μl，混匀。室温放置5min，以蒸馏水调零，酶标仪测定505nm处各孔的吸光度。各孔的吸光度均减去”0”号孔的吸光度，所得吸光度的差值(纵坐标)与对应的卡门酶活力单位(横坐标)作图。
3、AST酶促反应：按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
4、AST测定：混匀，室温放置5min，以蒸馏水调零，酶标仪505nm处测定对照孔、测定孔的吸光度(即为A对照、A测定)。

计算：以标准活力单位(24、61、114、190)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，测定孔的吸光度减去对照孔的吸光度的差值(即A测定-A对照)，从标准曲线查得AST活力单位。
参考范围：成年健康人血清AST：8~28卡门单位/ml



注意事项：
1、二硝-基苯-肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。
2、由于赖氏法的特点，在绘制标准曲线时每个点做3孔的重复测定，求出各标准管的吸光度均值，减去“0”号管吸光度均值后，对照赖氏单位绘制标准曲线。
3、血清中AST活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。
4、成批样本测定时，一般无需每份样本都做自身血清对照，以试剂空白代替即可，但对于
超过正常范围的血清样本，应该进行复测，复测时每份样本都应做自身血清对照。
5、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定孔的吸光度增高，因此检测该类样本时
应做自身血清标本对照。
6、当样本的酶活力大于190卡门单位时，应将样本进行5~10倍稀释后再行测定。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。