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- 百奥莱博
- BTN70804-AZJ
- 北京
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
88
- 英文名：
One-step single colony plasmid DNA extraction Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
常温运输及保存(溶液A需要4℃)
- 规格：
50次
特别提示：包括一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒
英文名称：One-step single colony plasmid DNA extraction Kit
产品货号：一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒
产品规格：50次
本试剂盒是在一步式质粒DNA提取试剂盒(BTN70301)基础上开发的、能够从单个菌落快速提取质粒DNA的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到可以用常规电泳方法检测得到的质粒DNA是由于一步式细菌裂解技术能够使细菌释放出其几乎所有的质粒DNA。
试剂盒特点：
1. 不需过夜培养细菌就可以提取质粒DNA，能为研究人员节约一天的宝贵时间。
2.快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
3.一步式裂解细菌，不使用强碱溶液，对DNA 损伤小。
4. 得到的质粒DNA 足够1-2次电泳或酶切实验，足够多次PCR、测序和细菌转化实验。
5.适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝的质粒。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 5ml |
| 离心吸附柱 | 50只 |
| 离心吸附柱收集管 | 50只 |
| 通用预洗液 | 50ml |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输及保存(溶液A需要4℃保存)，有效期一年。
使用方法：
1. 用吸头挑取一个直径在2 mm以上的菌落到100μl一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒溶液A中(溶液A用前摇匀)，充分吹打或振荡裂解直到裂解液变澄清。
2. 直接将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。
3.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前需要加热到60℃左右使之融化，混匀后再用。
4. 再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此步预洗最好别省略，否则DNA 纯度不高。
5.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。
6. 再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。
7. 再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，最后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。
8.室温12000～15000g离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA 沉不到加样孔里去)和酶反应。
9. 将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中，加入30-100μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0预热到65-80℃，则效果更好。
10.室温12000～15000g离心半分钟，离心管底部溶液即为质粒DNA，可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。
除了一步法单菌落质粒DNA提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN80102 | 柱式粪便DNA提取试剂盒 | 50次 |
| BTN60705 | 一管式植物DNA提取试剂盒 | 50次 |
| BTN80912 | 大提柱式质粒DNA提取试剂盒 | 5次 |
| WE0177 | 柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml) | 50次 |
| WE0181 | 酵母基因组DNA提取试剂盒 | 50次 |
| WE0183 | 游离DNA提取试剂盒 | 50次 |
| WE0208 | 磁珠法血液DNA提取试剂盒 | 96次 |
| ALH075 | 柱式质粒小量提取试剂盒 | 100次|200次 |
| ALH082 | 酵母质粒小量提取试剂盒 | 50次 |
| QN0890 | 真菌基因组DNA提取试剂盒 | 50T|100T |
| QN0901 | 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 | 10T |
| MT0012 | 病毒DNA/RNA快速提取试剂盒(10分钟) | 50T |
| MT0050 | 血液微量DNA提取试剂盒 | 50T |
| GL1256 | 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒 | 50T |
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文献和实验一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。 主要步骤如下： 收集1.5mL菌体，彻底除去培养基； 加入50ulSTE缓冲液重悬菌体； 加入50ul酚：氯仿;异戊醇（25：24：1），混匀； 12000rpm离心5分钟，取上清到另一离心管中； 加入NH4Ac至终浓度2M，并加入2倍体积的乙醇，混匀，室温或冰上放置几分钟； 12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇清沉淀； 沉淀干后，以水或TE缓冲液溶解，便
的浓度。 4.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现切口、断裂或降解现象？ （1）使用的是收集后冷冻保藏的细菌。解决方法：使用新鲜培养的细菌。 （2）宿主菌富含核酸内切酶。解决方法：增加一步 Rinse A 洗涤步骤以彻底去除残留的核酸内切酶。或者将质粒 DNA 进行乙醇沉淀。 （3）质粒 DNA 在 Solution II 中暴露过久，易造成质粒 DNA 的切口断裂。裂解步骤控制在 5 分钟内完成。 （4）培养的细菌被杂菌污染。解决方法：重新挑取单菌落培养细菌。 5.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现基因
质粒浓度。 4. 提取质粒超螺旋比例太低 通常来说，超螺旋被认为是一种能够最有效地提高转染效率和目的基因表达量的质粒形态。如果提取质粒的超螺旋比例太低，可以从以下几个方面考虑优化： ①裂解缓冲液添加后，切勿裂解太长时间，不要超过 5 min； ②添加中和缓冲液后操作轻柔，切勿剧烈震荡，否则会导致超螺旋结构断裂为开环或线性形式； ③使用合适的菌株来扩增质粒，比如 endA–菌株； ④挑选多个单菌落进行小量质粒抽提检测，挑选超螺旋比例高的单菌落来扩繁摇菌抽提质粒; ⑤另外，超螺旋的比例还跟质粒
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