- ¥290
- 钦诚生物
- QC70804
- 上海
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
一年
- 供应商：
钦诚生物
- 保存条件：
室温
- 规格：
50次
能够从单个菌落快速提取质粒 DNA 的产品。它之所以能够从单个菌落中提取到
可以用常规电泳方法检测得到的质粒 DNA 是由于一步式细菌裂解技术能够使
细菌释放出其几乎所有的质粒 DNA。本产品具有下列特点：
1. 不需过夜培养细菌就可以提取质粒 DNA，能为研究人员节约一天的宝贵时
间。
产品及特点
2. 快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
3. 一步式裂解细菌，不使用强碱溶液，对 DNA 损伤小。
4. 得到的质粒 DNA 足够 1-2 次电泳或酶切实验，足够多次 PCR、测序和细
菌转化实验。
5. 适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝的质粒。
使用方法 1.用吸头挑取一个直径在 2 mm 以上的菌落到 100 uL 一步法单菌落质粒
DNAout 溶液 A 中（溶液 A 用前摇匀），充分吹打或振荡裂解直到裂解液
变澄清。
2. 直接将裂解液全部转移到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟使质粒 DNA 与
膜结合。室温 12000-15000 g 离心半分钟，弃穿透液。
3. 在离心吸附柱中加入 0.7 mL 的通用预洗液，室温 12000-15000 g 离心
半分钟，弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀，用前
需要加热到 60℃左右使之融化，混匀后再用。
4. 再在离心吸附柱中加入 0.3 mL 的通用预洗液，室温 12000-15000 g 离
心半分钟，弃穿透液。此步预洗最好别省略，否则 DNA 纯度不高。
5. 在离心吸附柱中加入 0.7 mL 的通用洗柱液，室温 12000-15000 g 离心
半分钟，弃穿透液。
6. 再在离心吸附柱中加入 0.7 mL 的通用洗柱液，室温 12000-15000 g 离
心半分钟，弃穿透液。此为第二次洗涤。
7. 再在离心吸附柱中加入 0.4 mL 的通用洗柱液，室温 12000-15000 g 离
心半分钟，弃穿透液。此为第三次洗涤，如果不洗涤三次，最后得到的质
粒 DNA 的 OD260 和 280 的比值达不到 1.8。
8. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，
否则残留乙醇会影响后续的电泳上样（DNA 沉不到加样孔里去）和酶反应。
9. 将离心柱置于一个新的 1.5 mL 自备塑料离心管中，加入 30-100 uL DNA
洗脱液 2.0，室温放置 2 分钟。如果将 DNA 洗脱液 2.0 预热到 65-80℃，
则效果更好。
10. 室温 12000-15000 g 离心半分钟，离心管底部溶液即为质粒 DNA，可以
直接用于后续实验或放冰箱长期保存。
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文献和实验一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。 主要步骤如下： 收集1.5mL菌体，彻底除去培养基； 加入50ulSTE缓冲液重悬菌体； 加入50ul酚：氯仿;异戊醇（25：24：1），混匀； 12000rpm离心5分钟，取上清到另一离心管中； 加入NH4Ac至终浓度2M，并加入2倍体积的乙醇，混匀，室温或冰上放置几分钟； 12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇清沉淀； 沉淀干后，以水或TE缓冲液溶解，便
的浓度。 4.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现切口、断裂或降解现象？ （1）使用的是收集后冷冻保藏的细菌。解决方法：使用新鲜培养的细菌。 （2）宿主菌富含核酸内切酶。解决方法：增加一步 Rinse A 洗涤步骤以彻底去除残留的核酸内切酶。或者将质粒 DNA 进行乙醇沉淀。 （3）质粒 DNA 在 Solution II 中暴露过久，易造成质粒 DNA 的切口断裂。裂解步骤控制在 5 分钟内完成。 （4）培养的细菌被杂菌污染。解决方法：重新挑取单菌落培养细菌。 5.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现基因
质粒浓度。 4. 提取质粒超螺旋比例太低 通常来说，超螺旋被认为是一种能够最有效地提高转染效率和目的基因表达量的质粒形态。如果提取质粒的超螺旋比例太低，可以从以下几个方面考虑优化： ①裂解缓冲液添加后，切勿裂解太长时间，不要超过 5 min； ②添加中和缓冲液后操作轻柔，切勿剧烈震荡，否则会导致超螺旋结构断裂为开环或线性形式； ③使用合适的菌株来扩增质粒，比如 endA–菌株； ④挑选多个单菌落进行小量质粒抽提检测，挑选超螺旋比例高的单菌落来扩繁摇菌抽提质粒; ⑤另外，超螺旋的比例还跟质粒
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