Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)

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产品名称：Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称：Ki67 cell proliferation Detection Kit

产品货号：Ki67细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
产品规格：20T

Ki67 蛋白是细胞周期相关的一种核蛋白，主要表达于细胞增殖分裂的各个时期（G1、S、G2 和M 期），但是在静息的细胞（G0 期）中不表达。Ki67 常用于检测肿瘤细胞的生长指数（免疫组化法利用计算细胞总数中的Ki67 阳性细胞数所占比例得到Ki67 指数）。

Ki67 通常通过标记抗Ki67 的抗体（FITC 绿色荧光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，红色）而利用流式细胞仪检测来实现对细胞周期的检测。

操作方法
1. 在最适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul Ki67 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。

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