Stable电击感受态细胞

特别提示：包括Stable电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Stable电击感受态细胞
英文名称：stable Electroporation-Competent Cell

产品货号：Stable电击感受态细胞
产品规格：5×50μl/20×50μl

Stable电击感受态细胞只能用于电击转化，不可用于热激转化。Stable菌株是高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。
基因组含有重组酶recA1 rel A1突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核酸酶endA1突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。
lacZΔM15的存在使Stable可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和链霉素抗性。
Stable电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种具有末端重复序列的复杂DNA文库构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
F"proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10(TetR)∆(ara-leu)7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL(StrR)rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)
操作说明：
1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的Stable电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100ng/μl，体积不超过5μl/50μl感受态。
3.用200 μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管(BD Falcon50ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至5ml。30℃，225 rpm复苏90分钟。当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟。
6.5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养20-24小时。
注意事项：
1.对不稳定DNA片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。
2.制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后提取质粒。
3.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。
4.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
5.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
6.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
7.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
8.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
9.对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
10.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
11.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

除了Stable电击感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：青霉素G钠盐溶液
货号：BTN120698
规格：10mL
本产品为浓度200mg/mL的青霉素G钠盐溶液，参考浓度100mg/mL。青霉素G 钠盐(苄基青霉素钠盐；Benzylpenicillin sodium salt)，分子式：C16H17N2NaO4S，分子量：356.37，CAS号：69-57-8。溶于水。常用的用途有生化研究、培养基的配制和抗生素等。

储存条件：低温运输、-20 ℃避光保存，有效期为6个月。

名称：C端His标签融合蛋白质粒
货号：YT471
规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达C端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码His标签的序列，因此可以表达出含有His标签的融合蛋白，可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
multiple cloning site	680-740
c-His tag	741-758
T7 promoter and T7 primer binding site	811-832
SV40 polyA signal	844-1227
f1 origin of ss-DNA replication	1365-1669
bla promoter	1694-1818
SV40 promoter	1838-2176
neomycin/kanamycin resistance ORF	2211-3002
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3003-3461
pUC origin	3590-4257

本质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。