即用型荧光定量RT-PCR试剂盒

特别提示：包括即用型荧光定量RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称：Instant Realtime RT-PCR Kit

产品货号：即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
产品规格：50次

本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix)，将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR体系最低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的最长达2000nt。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式qRT-PCR Buffer，2×	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照)：

成分	样品
自备RNA模板(分下面三种情况)	见下
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	0.01pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM(注1)
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM
RNase-free水	补到10μL
双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×)	15μl
自备ROX(某些荧光PCR机型需要)	3μL(注2)
MMLV-Taq Mix	2μl

 注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。
 注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、最后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

除了即用型荧光定量RT-PCR试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：


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MT0036 超纯dNTP混合物(10mM) 1mL
GL1304 二磷酸腺苷溶液(ADP,1mmol/L) 10ml