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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
pcloneEZ-TA TOPO cloning kit
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
| PcloneEZ-Blunt TOPO Cloning Kit |
| 规格: | 25次(无感受态) |
| 规格: | 25次(含感受态) |
| 规格: | 50次(无感受态) |
| 规格: | 50次(含感受态) |
作用载体抗体:kan
作用:适用于taq,LA-taq等聚合酶扩增制备的末端加A片段的克隆


TOPO克隆技术:1997年诞生的TOPO克隆技术,颠覆了之前的一切,5分钟即可完成连接实验!
Clone Smarter第二代克隆载体:Vaccinia TopoisomeraseI 牛痘病毒拓扑异构酶I特异性识别topo载体 5 ’ -CCCTT-3’序列并形成中间体,与之共价结合的TopoisomeraseI 能将切开的载体片段和具有5’-OH 的DNA片段迅速连接起来
1. 真正做到零背景!载体不会自连!
由于 拓扑异构酶I可以把任何DNA连接起来,所以TOPO载体自连的背景高
但Clone Smarter克服了这一点,该独特技术全球独有!
长的就是对的,无需再次筛选!
2. 高效率( 转化子数更多,阳性率更高, ≥5kb基因仍有95%以上的阳性率)
酶已偶联到载体上,连接效率更高
3. 省时: 连接+转化最快仅5min ( 真正做到长片段连接5min也能保证足够转化子 )
4. 无需蓝白班筛选:载体不含LacZ基因,平板无需涂IPTG和X-Gal( 省时省钱),不会产生“白边蓝芯”克隆菌
5. 操作简单: PCR片段 + TOPO载体 + 增强剂 ,PCR产物无需酶切,室温下连接混匀 时间 ≤5min即可转化
6. 耐受部分毒性基因:由于载体含有3个终止子,能最大程度降低表达背景,可耐受一些低毒性基因的克隆
7. 原装进口, 超高性价比:按照5ul体系实验,成本不足11元/次!
25次!(10ul体系) 载体浓度高达20ng/ul
( Clone Smarter试剂盒提供的载体量按照110%提供,多提供了10%的优惠量!)
Blunt-TOPO载体(Amp/Kana抗性)图谱: C5861(载体含酶切位点,方便获取目的基因) C5851 ![]() |
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文献和实验℃,而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃,应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多,不过质量高,95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次,时间就是金钱,这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶,你可以选择在PCR之后加A,或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连,所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题,Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术,用在TOPO载体上。这个技术
子 (5)Terms 终止信号 (6)加 poly(A)信号可以起到稳定 mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点: 【1】构建 DNA 重组体的目的,克隆扩增/基因表达,选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型: (1)克隆载体的克隆能力-据克隆片段大小(大选大,小选小)。如 (2)表达载体据受体细胞类型-原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+ 多l克隆位点:MCS克隆携带外源基因片段 P/E:启动子/增强子
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