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- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
TOPO
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
-20°C保存
- 规格:
50T
| 品牌: | Clone Smarter |
| 货号: | C5862 |
| 保质期: | 2年 |
| 保存条件: | -20度冻存 |
| 规格: | 10次(无感受态)/25次(无感受态)/25次(含感受态)/50次(无感受态)/50次(含感受态) |
| 规格: | 25次(无感受态) | ||
|---|---|---|---|
| 规格: | 25次(含感受态) | ||
| 规格: | 50次(无感受态) | ||
| 规格: | 50次(含感受态) |
| PcloneEZ-Blunt TOPO Cloning Kit |
载体抗性:Kan
作用:适用于pfu、KOD、Phusion等高保真聚合酶扩增制备的平末端片段的克隆。


TOPO克隆技术:1997年诞生的TOPO克隆技术,颠覆了之前的一切,5分钟即可完成连接实验!
Clone Smarter第二代克隆载体:Vaccinia TopoisomeraseI 牛痘病毒拓扑异构酶I特异性识别topo载体 5 ’ -CCCTT-3’序列并形成中间体,与之共价结合的TopoisomeraseI 能将切开的载体片段和具有5’-OH 的DNA片段迅速连接起来
1. 真正做到零背景!载体不会自连!
由于 拓扑异构酶I可以把任何DNA连接起来,所以TOPO载体自连的背景高
但Clone Smarter克服了这一点,该独特技术全球独有!
长的就是对的,无需再次筛选!
2. 高效率( 转化子数更多,阳性率更高, ≥5kb基因仍有95%以上的阳性率)
酶已偶联到载体上,连接效率更高
3. 省时: 连接+转化最快仅5min ( 真正做到长片段连接5min也能保证足够转化子 )
4. 无需蓝白班筛选:载体不含LacZ基因,平板无需涂IPTG和X-Gal( 省时省钱),不会产生“白边蓝芯”克隆菌
5. 操作简单: PCR片段 + TOPO载体 + 增强剂 ,PCR产物无需酶切,室温下连接混匀 时间 ≤5min即可转化
6. 耐受部分毒性基因:由于载体含有3个终止子,能最大程度降低表达背景,可耐受一些低毒性基因的克隆
7. 原装进口, 超高性价比:按照5ul体系实验,成本不足11元/次!
25次!(10ul体系) 载体浓度高达20ng/ul
( Clone Smarter试剂盒提供的载体量按照110%提供,多提供了10%的优惠量!)
C5862 载体含酶切位点,方便获取目的基因 C5852 载体不含酶切位点 |
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法,但载体和Topo平端的一样,含ccdB基因,所以同样可降低菌落背景,易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
和Topo平端的一样,含ccdB基因,所以同样可降低菌落背景,易于筛选。 表10 PCR 克隆 试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method
9.0 +44 表1说明 列出的基因使用GeneRacer™步骤扩增。PCR产物使用S.N.A.P.凝胶回收柱回收并克隆至pCR®4-TOPO®载体(Invitrogen)。对每一个基因都随机挑选了12个克隆并测序。序列同GenBank数据库中的序列相比较,确定5’末端超出的序列。使用每个基因所获得的最长序列比较统计超出GenBank序列第一个碱基的多余碱基的数目。 获得全长的cDNA序列 GeneRacer™试剂盒确保您成功获得mRNA转录本的全长
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