- ￥175 - 1383
- 翌圣生物（Yeasen）
- 10906ES
- 上海
- 2025年10月16日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Hieff Clone® Universal Zero TOPO TA/Blunt Cloning Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
5 T(10906ES08)/20 T(10906ES20)/50 T(10906ES50)
| 规格： | 5 T(10906ES08) | 产品价格： | ￥175.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 20 T(10906ES20) | 产品价格： | ￥655.00 |
| 规格： | 50 T(10906ES50) | 产品价格： | ￥1383.00 |
组分信息
| 组分编号 | 组分名称 | 10906ES08 | 10906ES20 | 10906ES50 |
| 10906-A | 2× Hieff Clone® Universal TOPO Cloning Premix | 25 μL | 100 μL | 250 μL |
| 10906-B | 1 kb control insert (40 ng/μL) | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 10906-C | M13 Forward Primer(10 μM) | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
| 10906-D | M13 Reverse Primer(10 μM) | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
- 反应体系
| 组分 | 用量 |
| 2× Hieff Clone® Universal TOPO Cloning Premix | 5 μL |
| 插入片段* | 0.5-5 μL |
| ddH2O | To 10 μL |
- 反应条件
- 转化
2）取10 μL冷却重组产物，加入到100 μL感受态细胞中，轻弹管壁数下混匀，在冰上放置25 min。
3）42℃热激60 sec，冰上孵育2 min。
4）加入500 μL SOC或LB培养基，37℃，200 rpm，摇菌60 min。
5）5000 rpm离心4 min，弃上清至100 μL，用剩余培养基重悬菌体。用无菌涂布棒将菌液均匀涂抹在含有正确抗性的平板上。待菌液被培养基吸收后，倒置平板，于37℃过夜培养。
- 克隆鉴定
M13F ：GTAAAACGACGGCCAGT
M13R ：CAGGAAACAGCTATGAC
注意事项
- 需自备的材料：
- 超级感受态：转化效率＞108 cfu/μg，如翌圣DH5α超级感受态细胞（Cat#11802ES）。
- 高保真酶：2× Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)（Cat#10154ES）或其他等效产品。
- 菌落PCR mix：2× Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)（Cat#10157ES）或其他等效产品。
- 核酸染料：YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)（Cat#10202ES）或其他等效产品。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
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文献和实验℃，而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃，应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多，不过质量高，95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次，时间就是金钱，这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶，你可以选择在PCR之后加A，或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连，所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题，Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术，用在TOPO载体上。这个技术
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆 与Topo TA方法一样，操作简单快速。 平端PCR 克隆 方法（Zero Blunt PCR Cloning Kit） Zero Blunt PCR 克隆 乃利用传统T4连接酶方法，但载体
