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- 2025年07月15日
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RNAi干扰
RNAi载体构建服务
♦ 利用细胞内源性miRNA加工机制，更高效地表达RNA发夹结构，采用GFP表达追踪和顺式表达多个miRNA的优点。
每个基因设计的4条RNAi Select序列，我们保证至少有1-2条可以达到至少70%转录水平的knockdown（在转染效 率>80%的前提下）。
♦ 针对特定靶基因的mRNA序列设计shRNA引物，并将其构建到由U6或H1启动子介导的慢病毒表达载体中。
♦ 利用抗生素及GFP/RFP来筛选稳定表达shRNA或miRNA的稳定细胞株和构建基因沉默的细胞系。
RNAi干扰效果检测
♦ 通过Real-time PCR方法检测细胞在转染RNAi后，靶基因mRNA水平的干扰效果。
♦ 通过Wester blot方法检测蛋白水平的基因干扰效果。
info@cypeogen.com
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文献和实验（1）原理 腺病毒（adenovirus，AV）是一种没有包膜的线状双链DNA，它能感染分裂细胞和非分裂细胞，在核内以神经元细胞的形式复制，存在多种AV血清型。到目前为止，构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方法取代E1或E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制，因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力（尤其是在体外），由于具有宿主范围广，对人致病性低；在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因；能有效
感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 （2）服务流程 1）含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取； 2）慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞； 3）培养48~72h，收集培养上清； 4）病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）； 5）滴度测定、目的基因检定 6）将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。 客户提供 1）表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要
RNA干扰（RNA interference，RNAi）综述
本文由 生物 秀根据华西医学中心微 生物 学教研室ZYH的课件编辑而成 RNA 干扰（RNA interference，RNAi） RNAi是与靶基因序列同源的双链RNA(dsRNA)所诱导的一种特异性基因沉默现象。它是真核生物中存在的一种抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制，具有重大生物学意义。
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