L-乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒，荧光法

产品优势

在100μL反应体系中检测低限可达1 mU/mL

适用范围

用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等多种生物样本中L-乳酸脱氢酶（L-LDH）的检测

产品介绍

乳酸脱氢酶（LDH）是一种催化丙  酮酸与乳酸相互转化的氧化还原酶。该酶广泛存在于动物、植物等多种生物体的细胞质中。当组织损伤或红细胞发生溶血时，细胞会将LDH释放入血液。由于LDH具有高度稳定性，其活性检测被广泛应用于评估组织及细胞的损伤程度和毒性作用。LDH定量分析在临床诊断和科研领域具有重要价值，某些病理状态（如恶性肿瘤）可导致LDH水平显著升高。

Amplite® L-乳酸脱氢酶检测试剂盒采用高灵敏度荧光检测法，适用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等多种生物样本中L-乳酸脱氢酶（L-LDH）的检测。该酶偶联反应体系中，LDH活性与NADH浓度呈线性相关，通过特异性荧光NADH传感器进行精准监测。本检测方法对L-LDH具有高度特异性，检测信号可通过荧光酶标仪直接读取。实验验证表明，该荧光法Amplite® L-乳酸脱氢酶检测试剂盒在100μL反应体系中检测低限可达1 mU/mL。

适用仪器

96孔板测定示例

概述

制备D-乳酸测定混合物（50μL）

加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。