组蛋白提取试剂盒，Histone Extraction Ki

样品分析方案

概述

1.向细胞沉淀中加入ReadiPrep™预裂解缓冲液，在冰上孵育15分钟。

2.以13000转/分钟的转速对细胞进行离心15分钟。

3.收集上清液，并标记为“细胞质”级分。

4.向细胞沉淀中加入ReadiPrep™裂解缓冲液，然后对样品进行超声处理。

5.将混合物在冰上孵育60分钟。

6.以13000转/分钟的转速离心细胞15分钟。

7.收集上清液，加入含DTT的ReadiPrep™平衡缓冲液，并标记为“组蛋白”组分。

重要提示：使用前检查缓冲液，查看其中是否含有盐沉淀。若有，在室温或37°C下加热并摇晃缓冲液，直至盐重新溶解。

工作溶液配置

通过将10微升二硫苏糖醇（DTT）溶液（成分D）加入10毫升ReadiPrep 平衡缓冲液（成分C）中，制备ReadiPrep 平衡缓冲液工作溶液。

注意：我们建议根据需要新鲜配制ReadiPrep 平衡缓冲液工作液。将ReadiPrep 平衡缓冲液工作液储存在低于-15°C的环境中可能会导致沉淀。

样本实验操作流程

1.收获细胞，并以1000转/分钟的转速离心5分钟使细胞沉淀。

2.将细胞重悬于200微升的ReadiPrep 预裂解缓冲液中，然后在冰上裂解细胞15分钟。

注意：建议使用上述所示体积的10^7个细胞。为实现最佳提取效果，必须根据所示缓冲液体积优化细胞数量。 

可选：为提高通透性，可加入0.1% Triton X-100 PBS溶液处理3-5分钟，之后用PBS洗涤2-3次

3.将细胞在13000转/分钟的转速下离心15分钟。

4.收集上清液。上清液中将含有细胞质部分。

5.将剩余的细胞沉淀重悬于150微升的ReadiPrep 裂解缓冲液中，并涡旋样品。

6.以30%的功率对样品进行超声处理15秒。

7.将样品在冰上孵育60分钟。

8.将细胞以13000转/分钟的转速离心15分钟。

9.收集上清液，并加入90微升的ReadiPrep 平衡缓冲液工作液。

10.将组蛋白提取物等份分装并储存于-20°C可保存数天，或储存于-80°C用于长期保存。避免反复冻融循环。