- ¥180 - 1850
- YBscience
- YB2504
- 进口/国产
- 2025年07月15日
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- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
GS115毕赤酵母PEG感受态细胞
- 保质期：
三年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul / 20×100ul
GS115毕赤酵母PEG感受态细胞
货号 名称 规格 数量
YB2504 GS115酵母感受态细胞 50ul 5支
YB2505 GS115酵母感受态细胞 50ul 10支
YB2506 GS115酵母感受态细胞 50ul 20支
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产品介绍
本试剂盒包括酵母感受态细胞、Solution 1和Solution 2。其中酵母感受态细胞是用于转化的细胞，需-70度低温保存；Solution 1和Solution2为转化时使用的试剂，均为无菌，需-20度保存，使用时解冻即可。本酵母感受态细胞采用专利技术制备的感受态，有别于传统山梨醇制备的感受态细胞，并配有Solution 1和Solution 2，可直接用于热击法转化，而不需要使用电转仪和电击杯。本方法是电击法的替代方法，也避免了LiCl方法需要现制备感受细胞的繁琐。转化效率可以达到102-103cfu/ug线性化DNA，经本公司反复验证-80保存6个月不影响转化效率。
GS115毕赤酵母PEG感受态细胞 转化步骤
2.1 线性化质粒片段的制备
取过夜培养的质粒菌种3ml,使用质粒抽提试剂盒抽提质粒，最后溶解于50ul的TE或水中。将所有的质粒片段在200μl的体系中酶切线性化。用酚氯仿试剂去除蛋白并且浓度片段至20ul体系中（保证有100μg的质粒片段）。
2.2 转化
2.2.1直接加于冻结的酵母细胞中，以获得最大转化率； （注意加入至冻结的细胞中，而不是解冻的细胞中）；
2.2.2. 加入后迅速放入37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次；
2.2.3. 取出离心管，加入1.5ml Solution 1，彻底混匀；(注意可以弹或移液器轻轻混合，不可用移液器剧烈来回混合也不可用涡旋振荡器) ；
2.2.4. 30℃水浴孵育1h；
2.2.5. 室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml Solution 2中；
2.2.6. 离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml Solution 2中；
2.2.7. 将所有转化液铺于选择性平板（例如MD板），于30℃孵育3～4天后，鉴定；
GS115毕赤酵母PEG感受态细胞注意事项
1. 转化步骤1中DNA要加入至冻结的细胞中，注意不可解冻细胞后再加入DNA；
2. 转化步骤2中混合样品是必需的；
3. 转化步骤3中要充分混匀，但不可剧烈混合；
4. 所有混合细胞均要轻柔；
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X33，KM71，KM71H，INVS1菌株，感受态细胞
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文献和实验。 实验步骤 1. 感受态细胞制备： 1) 在YPD 平板上划线培养毕赤酵母菌，30 度孵育2天。 2) 从平板上挑取单克隆于10mlYPD 中，30度振荡过夜。 3) 早上，在100mlYPD 培养基中接种等量的过夜培养物，至OD600 达0.1，在30 度生长至OD600 为0.5-0.8。 4) 室温3000g离心收集细胞，用50ml Buffer A洗涤细胞1 次。
【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤！！！（从验证到阳性克隆的筛选）
小弟把最近一个多月来所做的工作，做了个总结，供大家一起分享，希望版主能加分，现在我还是0分，很多帖子不能阅览，希望版主加分，今后我实验有了新的进展，我会把总结发上来，和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF，目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结，再与大家分享。希望大家支持，绝对原创！！！ 一.实验材料 1．菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2．质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3．试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1
时配制： SED：19mlSE 加1ml 1M DTT PEG/CaT：1:1混合40%PEG及CaT 实验材料 GS115中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Mut 重组子 KM71中，用SalI，StuI或SacI线性化的DNA可分离His Muts重组子 亲代载体用相同酶线性化 对照包括无DNA，线性化PBR322DNA及质粒(无细胞)涂板来检测是否有污染
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