- ¥180 - 1850
- YBscience
- YB4431
- 进口/国产
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
KM71H Competent Cells
- 保质期：
三年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul / 20×100ul
| 货号 |
产品名称 |
规格 |
数量 |
| YB4431 |
KM71H酵母感受态细胞 |
100ul/支 |
20支 |
| YB4432 |
KM71H酵母感受态细胞 |
100ul/支 |
50支 |
| YB4433 |
KM71H酵母感受态细胞 |
100ul/支 |
100支 |
KM71H酵母感受态细胞产品介绍
本试剂盒包括酵母感受态细胞、Solution 1和Solution 2。其中酵母感受态细胞是用于转化的细胞，需-70度低温保存；Solution 1和Solution2为转化时使用的试剂，均为无菌，需-20度保存，使用时解冻即可。本酵母感受态细胞采用专利技术制备的感受态，有别于传统山梨醇制备的感受态细胞，并配有Solution 1和Solution 2，可直接用于热击法转化，而不需要使用电转仪和电击杯。本方法是电击法的替代方法，也避免了LiCl方法需要现制备感受细胞的繁琐。转化效率可以达到102-103cfu/ug线性化DNA，经本公司反复验证-80℃保存6个月不影响转化效率。
KM71H酵母感受态细胞 转化步骤
1. 线性化质粒片段的制备
取过夜培养的质粒菌种3ml,使用质粒抽提试剂盒抽提质粒，最后溶解于50ul的TE或水中。将所有的质粒片段在200μl的体系中酶切线性化。用酚氯仿试剂去除蛋白并且浓度片段至20ul体系中（保证有100μg的质粒片段）。
2. 转化
-
直接加于冻结的酵母细胞中，以获得最大转化率； （注意加入至冻结的细胞中，而不是解冻的细胞中）；
-
加入后迅速放入37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次；
-
取出离心管，加入1.5ml Solution 1，彻底混匀；(注意可以弹或移液器轻轻混合，不可用移液器剧烈来回混合也不可用涡旋振荡器) ；
-
30℃水浴孵育1h；
-
室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml Solution 2中；
-
离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml Solution 2中；
-
将所有转化液铺于选择性平板（例如MD板），于30℃孵育3～4天后，鉴定；
KM71H酵母感受态细胞注意事项
1. 转化步骤1中DNA要加入至冻结的细胞中，注意不可解冻细胞后再加入DNA；
2. 转化步骤2中混合样品是必需的；
3. 转化步骤3中要充分混匀，但不可剧烈混合；
4. 所有混合细胞均要轻柔；
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- 内容
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文献和实验相关专题 酵母感受态细胞制备可以：(1)用于建立酵母转化体系;(2)用于酵母表达系统 构建;(3)用于酵母其他分子生物学研究。 一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌用-酵母提取物(Fisher)、 细菌用-蛋白胨(Fisher)、葡萄糖(Fisher)、细菌用-琼脂粉、去离子水、甘油(Sigma)、二甲基亚砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸锂(Sigma)、鲑鱼精子细胞DNA
离心收集酵母菌体； 重悬酵母于1ml YPD培养基，30℃摇床孵育； 1～4h后，取25～100ul菌液铺选择性培养基平板，于30℃培养2～3天鉴定； 2、毕氏酵母PEG1000转化法 （1）试剂 缓冲液A：1.0M Sorbitol，10mM Bicine，pH8.35（sigma）,3%（v/v）ethylene glycol 缓冲液B：40%（w/v）PEG1000（sigma），0.2M Bicine，pH8.35 缓冲液C：0.15M NaCl，10mM Bicine，pH
细胞，随后于室温1500 g 离心5 min离 心收集细胞，弃上清。 （7）用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞，以每管50 μl 分装。 酿酒酵母细胞的转化 （1）取50 μl 感受态细胞，再加入待转质粒各2 μl，混匀。 （2）加入500 μl 转化用溶液（PEG/LiAc，二甲亚砜），弹击管壁混匀。 （3）30℃水浴1 h，隔15min弹击管壁混匀。 （4）加入1毫升YPD培养液，30℃摇床培养1小时。 （5）3500 g 离心5 min ，留沉淀，弃上清。 （6）沉淀
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