XL10-Gold 感受态细胞常规操作方法: 1. XL10-Gold感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。 2. 42℃水浴热激35秒(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.),迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。 4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。