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- USA
- 2025年11月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
11551
- 库存：
11551
- 英文名：
Amplite™ Colorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit
- 保存条件：
低温
- 规格：
500 Tests
Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 蓝色
过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如氮 化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双 氧 水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 664 ± 5nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。
1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。
1.3 H2O2溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H2O2（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H2O2溶液。 注意：稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。
2.标准溶液
HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 - SD1）和分析缓冲液（组分C）。
3.工作溶液
将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H2O2储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。
样品分析
表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释（0.3至300 mU / mL） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分C） |
| TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。
4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。
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