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11551
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Amplite™ Colorimetric Peroxidase (HRP) Assay Kit
低温
500 Tests
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 664 ± 5nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备HRP工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite 蓝色底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。
1.2 HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到HRP小瓶(组分D)中以制备20U / mL HRP储备溶液。
1.3 H2O2溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。
2.标准溶液
HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液(组分C)中,得到300mU / mL的HRP标准溶液(SD7)。 取300 mU / mL HRP标准溶液(SD7),进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6 - SD1)和分析缓冲液(组分C)。
3.工作溶液
将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液(100X)和50μL的H2O2储备溶液(20 mM)加入到4.9 mL的分析缓冲液(组分C)中,使总体积为5 mL的HRP工作溶液,避光。
样品分析
表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.3至300 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
SD1 | SD1 | ... | ... |
SD2 | SD2 | ... | ... |
SD3 | SD3 | ||
SD4 | SD4 | ||
SD5 | SD5 | ||
SD6 | SD6 | ||
SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释(0.3至300 mU / mL) |
BL | 50ul | 分析缓冲液(组分C) |
TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液,使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLHRP工作溶液,总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。
4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。
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参考文献
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