两步法RT-PCR试剂盒

特别提示：包括两步法RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：两步法RT-PCR试剂盒
英文名称：BalbScript Two-Step RT-PCR UltraMix
产品规格：RT(50次)&PCR(200次)

  本试剂盒基于本公司生产的BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶（百奥莱博货号：JN0011）和HotStart Taq DNA聚合酶（百奥莱博货号：JN0023），具有高效的合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix进行反转录，2×HotStart Taq PCR MasterMix进行扩增。本试剂盒含有从RNA反转录至cDNA并以cDNA为模板进行扩增的全部试剂。

产品特点：
1、反转录反应操作简单，通过减少实验步骤降低了污染几率。
2、使用HotStart Taq酶进行扩增，减少非特异性反应。

试剂盒组成：

组份	JN0007-50次
2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix	500ul
2×HotStart Taq PCR MasterMix	1ml×2支
RNase Free Water	1ml

操作方法：

第一链cDNA合成：
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物

模板RNA	总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg)
2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix	10μl
RNase Free Water	至20μl

3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟，冰上冷却后再加入其它组分。
4、轻柔混匀后离心，于42℃条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构，可先在25℃条件下孵育5分钟，随后转到42℃条件下孵育60分钟。
5、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

第一链cDNA的PCR扩增：
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。

常用反应体系（20μl）：

2×HotStart Taq PCR MasterMix	10μl
上游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
下游引物	0.2-1.0μM（终浓度）
模板	1μl
Taq
ddH2O	至20μl

储存条件：-20℃