- ￥2028
- 西格
- XG-P2838
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
49
- 保质期：
12 个月
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
RT体系/PCR 体系20ul×50 次 /50ul×80 次
制品说明：
M-MLVⅢ 是通过基因重组技术改造，在大肠杆菌中表达纯化得到的高温反转录酶，去除RNaseH活性。可在37℃-55℃条件下合成第一链cDNA，具有灵敏度高，特异性高，热稳定性高和半衰期长的特点。聚合能力强，具有更强的延伸能力，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。PCR使用2× Xerox PCR MasterMix扩增。本试剂盒含有从RNA到cDNA，以及PCR扩增cDNA的全部试剂。
产品特点：
1. Anchored Oligo(dT)20设计独特能锚定mRNA Poly(A)+ 的5′端区域，退火位点锚定，特异性高，保证cDNA 合成效率和成功率
2. 可用Random Primer （N9）或基因特异引物（GSP）合成第一链cDNA；
3. 合成片段≤15kb；
4. 适用于高拷贝基因检测。
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2838 | M-MLV III Two-Step RT-PCR Kit 逆转录两步法通用试剂盒 | RT体系/PCR 体系20ul×50 次 /50ul×80 次 |
1、变性温度和时间：
M-MLV III Two-Step RT-PCR Kit 逆转录两步法通用试剂盒保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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文献和实验SuperScript III One-Step RT-PCR System with Platinum® Taq High Fidelity
for 25 or 100 amplification reactions of 50 µl each. Note: This kit has been optimized for end-point RT-PCR. For quantitative real-time RT-PCR, use the SuperScript™ III Platinum® One-Step Quantitative RT-PCR System. 实验
检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。 RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行
This protocol uses C. therm. Polymerase One-Step RT-PCR system from Roche. 1. Setup master mix 1: 25 mM dNTP 0.8 m l DMSO
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