RIPA裂解液（2X）

RIPA裂解液配方

1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin

免疫共沉淀实验指南

细胞沉淀后，加入预冷的 RIPA 液（含PMSF），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。轻轻混匀细胞悬液，用振荡器在 4℃ 振荡 15min 以裂解细胞。 用经蒸馏水预冷的橡皮或塑料细胞刮棒将贴壁细胞转移至一离心管中。 于 4℃，10000 rpm 离心裂解液 15 min，迅速转移上清至另一离心管中，弃掉沉淀。 将 Agarose protein A+G 珠子混匀：用预冷的 PBS 洗涤 Agarose protein A+G 珠子两次，并将其用 PBS 调

WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办？

「救命！做 WB 蛋白样品提取时，样品加入裂解液，离心后发现管里有很多的胶状物，非常粘稠，有点像鼻涕！多加裂解液稀释一下仍然没有效果，蛋白浓度还变得很低。不死心的我把它戳出来玩了一会，戳戳戳仍然是一大团，这粘稠物是什么？对我的后续实验会有什么影响？」 当你看到这团粘稠的「鼻涕」，就意味着你即将经历下面五个难题的考验： 1. 样品吸液困难 堵塞移液器：离心后吸上清液的时候胶状物会堵塞移液器头，移液后上清液所剩无几。 无法分离上清液：样品太