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- 百奥莱博
- WE0104-KIY
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
607
- 英文名：
2×Bes Taq MasterMix(With Dye)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别提示：包括2×Bes Taq MasterMix(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：2×Bes Taq MasterMix(含染料)
英文名称：2×Bes Taq MasterMix(With Dye)
产品规格：1ml|5ml|25ml
本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独*(代"创")的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，超过98%的PCR扩增能一次成功，同时复杂模板也能得到有效扩增，并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
产品组成：
| 组份 | 1ml | 5ml | 25ml |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml | 5×5ml |
注意：2×Bes Taq MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase，3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Bes Taq MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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文献和实验Fast Taq DNA Polymerase都能做到！产品特点：1. 超快速DNA合成(10-15 s/kb)。2. 大幅度提高保真性，约为Taq 酶的3倍，接近Pyrococcus furiosus DNA聚合酶（Pfu）的水平。3. 高退火温度。在比Tm值高3 °C的条件下，引物仍能有效与模板配对结合，有效打开二级结构，避免引物二聚体的形成，提高扩增特异性和效率。4. 能够从含抑制剂较多的模板直接扩增。5. PCR 产物3’末端有一个“A”碱基，可以直接用于T-载体连接克隆
时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
bp 片段，以 pBS 菌液为模板扩增 1500 bp 片段。 模板：菌液 OD600=0.8 时 2 μL /50 μL PCR 扩增程序：同上 a 扩增程序同。 结果：Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix 试剂对于质粒或菌液均可高效率的扩增。取扩增产物 10 μL 用 1% 琼脂糖凝胶电泳进行分析可见明亮条带。 二、genomic DNA扩增 1．大肠杆菌DNA扩增 模板：大肠杆菌DNA 50 ng/50 μL PCR扩增程序： 循环数 Step 温度
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