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- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
721
- 英文名：
Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
特别提示：包括蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合液Ⅰ在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合液Ⅰ
英文名称：Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
产品规格：1mL
组织/细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白*(代"磷")酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，导致不同于正常生理状态的差异，影响实验结果。因此，加入外源性蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态，是Western Blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白激酶活性测定等研究不可缺少的一步。本产品就是针对这一用途开发。
产品特点：
1．即开即用，不需要单独购买每个成分然后再配制。
2．由5种蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂(钒酸*、*化*、钼酸*、酒石酸*、咪唑)组成，各成分的浓度经过精心优化。
3．抑制谱广，能特异性地抑制丝*酸磷酸酶、苏*酸磷酸酶、酪*酸磷酸酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和ATP酶。
4．与各种细胞裂解液兼容。
5．使用简单，在细胞裂解液中按一定比例加入即可(根据蛋白*(代"磷")酸酶决定，一般按1/100的体积比)。
6．适用于Western blot、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等试验。
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1.在临用前溶解本产品，并按1/100的比例加入到细胞裂解液中(1mL细胞裂解液中加入10μl)。注意：对蛋白*(代"磷")酸酶含量特别丰富的组织，可以将加入比列提高到1/20-1/50。
2.后续处理按常规方法进行即可。
注意：避免反复冻融本产品，所以第一次溶化后，如果还有剩余，可将其分装成小份冻存，每次用多少取多少。
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文献和实验最近很多人问毛老师关于磷酸化的问题。比如：要检测的蛋白有磷酸化的，要加磷酸酶抑制剂吗？在做 erk1/2 磷酸化表达实验，提取总蛋白的时候需要加入磷酸酶抑制剂，什么抑制剂比较好？答案是：当然必须一定要加啊！毛老师来给大家简单解释一下。许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除。而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态。在细胞裂解的过程中溶酶体释放大量蛋白酶对磷酸化蛋白会产生极大影响，所以需要磷酸酶抑制剂对磷酸
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
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