蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅰ

湿兄，检测磷酸化蛋白要加磷酸酶抑制剂吗？

最近很多人问毛老师关于磷酸化的问题。比如：要检测的蛋白有磷酸化的，要加磷酸酶抑制剂吗？在做 erk1/2 磷酸化表达实验，提取总蛋白的时候需要加入磷酸酶抑制剂，什么抑制剂比较好？答案是：当然必须一定要加啊！毛老师来给大家简单解释一下。许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除。而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态。在细胞裂解的过程中溶酶体释放大量蛋白酶对磷酸化蛋白会产生极大影响，所以需要磷酸酶抑制剂对磷酸

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌

免疫共沉淀实验指南

-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集