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- 2025年08月17日
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文献和实验DNA发生反应。然后用酶标羊(或兔)抗鼠IgG抗体及相应底物进行显色。使用这一方法,可检测出单个抗原分子。材料与试剂包括: ①所测物的单克隆抗体(鼠)；②所测物的多克隆抗体(兔)；③生物素化羊抗鼠IgG；④生物素化羊抗兔IgG；⑤生物素化dUTP；⑥Klenow聚合酶；⑦PCR反应液；⑧引物(自行设计)；⑨生物素化DNA标记分子。
野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突变型p53蛋白。 样本来源 1. 人、鼠、兔的组织切片 2. 肿瘤细胞株 材料与试剂 1. 过氧化物酶标记的多克隆抗人-p53全抗体（检测抗体）； 2. 洗涤缓冲液（10x）； 3. 过氧化物酶底物液： 四甲基联苯
的抗体双重染色。目前，最常用的是最后一种方法。 不同种属来源的抗体双重染色，两种抗体 间无交又反应．特异性较高，即使细胞内抗原量很少也能检测。但是，当两种抗原存在于同一部位而其中之一浓度较高，占绝对优势时将妨碍另一种抗原染色，此种情况应分别染色，首先染色含量较少的抗原，再显示含量丰富的抗原。在该方法中应用最多的是把SABC法或SP法的实验流程重复两次，其中两种不同特异性抗体(可以是小鼠或大鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体的任何两个组合)，与一抗对应的不同种属生物素化二抗和两种不同显色
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