• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        P53蛋白检测

        互联网

        11228

        野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长,突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力,从而增强了细胞的恶性转化能力,而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法,定量检测野生型或突变型p53蛋白。

        样本来源

        1. 人、鼠、兔的组织切片

        2. 肿瘤细胞株

        材料与试剂

        1. 过氧化物酶标记的多克隆抗人-p53全抗体(检测抗体);

        2. 洗涤缓冲液(10x);

        3. 过氧化物酶底物液: 四甲基联苯胺(tetramethylmenzidine, TMB)液。

        4. TMB终止液;

        5. 孵育缓冲液;

        6. 链霉亲和素与生物素化抗p53抗体(捕捉抗体)包被的微孔板。

        操作步骤

        1. 制备标本(如细胞裂解液或组织匀浆),离心10,000xg,10分钟;

        2. 将离心后的上清液(水相)加至链霉亲和素与生物素化抗p53抗体预先包被的微孔板;

        3. 加入抗-p53-过氧化物酶(1:15)室温孵育2小时;

        4. 室温,用1x洗涤缓冲液洗板5次,每次1分钟;

        5. 加入过氧化物酶底物液,室温孵育,10-20分钟;

        6. 加入TMB终止液,室温反应1分钟,测定450nm吸光度;或直接测定370nm的吸光度。

        结果判断

        P53蛋白的含量与显色反应的强度成正比。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序