EZ-T™ A Tailing Kit

EZ-T™ A Tailing Kit

EZ-T™ A Tailing Kit利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在dATP存在的条件下，可在任意平末端线性DNA片段的3’-端加上单个脱氧腺嘌呤（dA）碱基，使平末端的DNA片段进行 TA克隆成为可能。与平末端DNA片段直接进行克隆相比，TA克隆具有更高的克隆效率，可以大大提高实验的成功率。本产品用途广泛，适用于各种平末端双链DNA片段的加dA反应，包括由Pfu、Pfx、Pwo、Phusion、Pyrobest或KOD等高保真DNA聚合酶扩增、用限制性内切酶如EcoRV、SmaI等消化、以及用DNA聚合酶补平后得到的平末端线性DNA片段。

用途
· 各种平末端线性DNA片段的克隆和测序

特点
· 适用范围广：PCR扩增、平端内切酶消化等各种需要进行TA克隆的线性平末端DNA片段
· 方便快捷：EZ-T™ 2×A-Tailing Buffer中含有除酶和目的DNA片段以外的所有成分，减少加样步骤，避免污染；加A反应产物无需纯化，直接与T载体连接
· 提供纯化的平末端PCR片段（EZ-Blunt™Control Insert）作为阳性质控对照

产品组分

 

EZ-T™ A-Tailing Enzyme	10 μl
EZ-T™ 2×A-Tailing Buffer	1 ml
EZ-Blunt™ Control Insert（40 ng/μl）	30 μl

保存条件

 

-20℃恒温保存一年

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产品	货号	页码
Pfu DNA Polymerase	XY121-01	032
HiFiTaq DNA Polymerase	XY116-01	035
2×HiFiTaq PCR StarMix with Loading Dye	XY017-01	020
StarPrep Gel Extraction Kit	XY205-01	105
StarPrep PCR & DNA Fragment Purification Kit	XY206-01	107

通用测序引物序列
T7 Promoter                                             5· -d（TAATACGACTCACTATAGGG）-3·
T3 Promoter                                             5· -d（ATTAACCCTCACTAAAGGGA）-3·
M13 Forward（-20）                                  5· -d（GTAAAACGACGGCCAGT）-3·
M13 Forward（-40）                                  5· -d（GTTTTCCCAGTCACGAC）-3·
M13 Reverse                                             5· -d（CAGGAAACAGCTATGAC）-3·
LB-Amp-X-gal-IPTG琼脂平板的快速制作方法
1. 根据所需平板数量（n），按每个平板加入20 μl的50 mg/ml X-gal，50 μl 的100 mM IPTG和30 μl灭菌ddH2O成比例混合上述试剂
2. 吸取100 μl混合试剂，加到含有100 μg/ml Amp 的LB琼脂平板表面，并迅速涂布均匀
3. 37oC放置30分钟即可涂菌
（注：过夜孵育后如果菌落显色不明显，可将平板在4oC放置10分钟，然后再于37oC孵育，将明显改善显色效果。）