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- 信裕生物
- XY3102
- 中国/上海
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
18
- 英文名：
PBCV DNA连接酶
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
1250U/5KU
PBCV DNA连接酶
PBCV DNA 连接酶也称为SplintR 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4 DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，PBCV DNA 连接酶不失为最佳选择用酶。
组分
| 组分名称 | 数量 |
| PBCV DNA Ligase(25 U/μl) | 50μl |
| 10×PBCV Ligation Buffer | 250μl |
应用
- 单链DNA的连接
- 基于探针法的miRNA的检测
- SNP或剪接体的检测
- RASL分析
活性定义
1 单位指 20 μl 反应体系中，1×PBCV 连接酶反应缓冲液，16℃ 条件下，15 分钟内能使 2 pmol 的DNA:RNA 杂交底物连接反应完成50%所需的酶量。反应温度及失活
该酶的最佳反应温度为25度，可在16-37度之间优化，37度可明显提高反应的特异性；该酶在65°C 加热20min即可失活。储存
-20℃可保存3年。使用注意事项
1. 1×PBCV Ligation Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，10mM DTT。
2. 该酶对ATP的要求比较宽泛，10-100uM ATP范围内都可发挥活性，5mM Mg2+可显著增加连接产物的量，最佳ph为7.5-8.0。
3. 该酶对一价阳离子非常敏感，如Nacl或KCl的浓度应低于50mM，100mM的Nacl会完全抑制连接反应。
4. 该酶的反应温度为16~37℃，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加，最佳温度为25 ℃。
5. 连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低，当长度小于等于10nt时，连接效率为零。
6. 供体的5’端第一个碱基为“A/T”时连接效率。
7. 受体的3’端第一个碱基为“T”时连接效率，3’端第一个碱基为“G”时连接效率最差。
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文献和实验。 由此题我发现，目的基因由两种限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时，两个黏性末端碱基互补，由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键，这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上，并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论：DNA连接
相关专题 重组DNA技术工具酶 连接酶旧称“合成酶”。DNA连接 酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接 酶
huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？ 谢谢啊！ zhujoker 聚合酶 yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微
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